茶多酚对冈田酸诱导大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化的作用与其对学习记忆的影响.pdf

茶多酚对冈田酸诱导大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化 的作用及其对学习记忆的影响 硕士研究生： 李洪玉 寺旨导教师： 邹原教授 专业名称： 生理学 摘 要 目的：阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)目前是老年人群痴呆的 主要原因，随着人口老龄化的加剧，全球发病人数日益增多。由于AD 严重影响患者的生活质量并给社会和家庭带来沉重的负担，因此对于该 病的防治显得尤为重要。AD的临床表现主要为进行性智能减退，病理特 征为老年斑(SP)、神经元纤维缠结(NFTs)、海马锥体细胞颗粒空泡变性 和神经元的缺失。SP的形成与p．样淀粉蛋白(AD)过量产生和沉积有关。 到目前为止，它们与神经细胞退行性变性之间的关系尚不十分清楚。NFT 的主要成分是过度磷酸化的Tau蛋白，它聚积在退行性变性神经元的胞 体并与AD患者临床痴呆程度正相关i1J，且Tau蛋白的病理改变出现在 痴呆症状之前并独立于AD异常12】。Tau蛋白是一种微管相关蛋白，主要 存在于神经元，具有促进微管组装和维持微管稳定的功能。在AD患者 脑中Tau蛋白丧失了正常生理功能，从而缠结形成NFTs。已知有多种蛋 白磷酸酯酶，如PP．2A，PP．1参与Tau蛋白的AD样异常磷酸化。 茶多酚(tea 物，其在B．环和C．环上的酸性羟基有很强的供氢能力，是天然的抗氧化 剂。其抗氧化能力明显优于强氧化剂维生素C、维生素E【3。。大量研究已 证实，TP在抑菌、抗病毒、抑制肿瘤、防治心血管疾病等方面具有良好 功效，同时还具有益肝保肾作用。且有文献证实，TP在体外培养的海马 神经元中能够减轻Ap诱导的神经毒性【4】，而长期给小鼠EGCG(表没食子 儿茶素没食子酸酯，茶多酚的主要成分)可以诱导海马APP水平的下降 【5】，此外TP还能够抑制AB原纤维的形成、延长和脱稳定性【61。但是TP 是否对于AD中Tau蛋白的过度磷酸化具有保护作用，目前尚无文献报 道。本实验通过冈田酸(okadaic acid，OA)诱导大鼠海马神经元Tau蛋白 过度磷酸化实验模型，研究茶多酚对OA致海马神经元Tau蛋白过度磷 酸化的作用及其大鼠学习记忆的影响。 方法：选用冈田酸(okadaidacid，OA)来诱导Tau蛋白过度磷酸化。 l model)和l00 损伤组(OA mg／kg、250mg／kg和625mg／kg不同浓度茶 多酚预处理组(TP)。除正常对照组大鼠外，其它各组大鼠分别灌胃给予 等量生理盐水或不同浓度TPo灌胃至第2l天时对各组大鼠进行空间学 习与记忆能力训练和行为学测试。至第27天时，向右海马背侧(前囟后 3．8mm，中线旁开2．5mm，深度3mm)定向注射OA1．59L(0．4731．tg，10％ 0min内缓慢注射，留针5min。溶媒对照组施以等体积 DMSO)，于1 10％DMSO。OA注射后第二天即第28天时，进行水迷宫考试，考试后 处死大鼠，收集标本。制作大鼠右侧脑组织石蜡切片，免疫组织化学染 色观察脑组织中海马处磷酸化的Tau蛋白表达分布情况。Westernblot方 法检测脑海马内磷酸化的Tau蛋白的表达并进行定量分析。 结果： 1．TP降低OA致海马神经元过度磷酸化Tau蛋白的表达 免疫组化结果显示，OA损伤组大鼠海马神经元胞体和突起的 Tau．pSer396表达较正常对照组和溶媒对照组大鼠海马区显著增多，呈 其中以250mg／kg和625mg／kg剂量组的作用较明显。Westernblot实验进 达量比正常组和溶媒对照组增加，而TP预处理各组则比OA损伤组降低， 且250 mg／kg和625mg／kg剂量组降低明显，具有统计学意义(p0．01)。 2。TP改善OA致大鼠空间记忆障碍 随着训练次数的增加，各组大鼠逃避潜伏期逐渐缩短，在给予OA 注射前TP预处理的三个组大鼠与OA损伤组大鼠相比其逃避潜伏期差异 后穿越平台的次数经Kruskal。Wallis H检验有显著性差异(p0．05)。在总 时间一定的情况下，OA损伤组大鼠给予OA后