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青花菜早中熟种质资源遗传多样性SRAP标记剖析 　　摘要：采用SRAP分子标记技术对12份青花菜早中熟种质资源进行遗传多样性分析。从48个引物组合中筛选得到28对多态性较好的引物组合，共检测到312条扩增条带，每个引物组合产生2至22个不等的条带，其中多态性片段为227条，多态性比例为75.76%，揭示所选青花菜种质资源间具有较为丰富的遗传多样性。相似系数分析表明种质间遗传相似系数为0.650 6～0.878 2，平均为0.786 2。聚类分析结果显示熟性和来源可作为青花菜早中熟种质聚类的重要农艺性状之一。 　　关键词：青花菜；遗传多样性；SRAP；早中熟种质 　　中图分类号：S635.303文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）01-0041-03 　　收稿日期：2013-06-04 　　基金项目：浙江省重大科技专项（编号：2010C12004）；浙江省农业新品种选育重大科技专项（编号：2012C12903-3-3）；浙江省自然科学基金（编号：LY12C15009）；浙江省温州市科技项目（编号：。 　　作者简介：荆赞革（1983―），男，河南三门峡人，博士研究生，助理研究员，研究方向为蔬菜遗传育种与生物技术。E-mail：jingzange@。 　　通信作者：唐征，硕士，副教授，主要从事蔬菜遗传育种与生物技术研究。Tel：（0577E-mail：tzeng05@163.com。青花菜（Brassica oleracea var. italica）属十字花科芸苔属甘蓝种变种，别称西兰花、绿花菜、绿菜花等，是我国重要的蔬菜作物之一。它营养全面，含有丰富的维生素C和抗癌物质芥子油苷，深受消费者喜爱。种质资源是作物遗传改良的基础，种质资源占有量和研究利用的深度对育种工作的成效起着至关重要的作用。因此，深入研究青花菜种质资源遗传多样性可以较好地帮助育种者了解青花菜的遗传信息、遗传结构及种质间亲缘关系，有助于对现有种质资源进行有效利用与选择，从而加速青花菜新品种选育进程。SRAP即相关序列扩增多态性（sequence related amplified polymorphism），针对基因外显子、内含子来设计特异引物，因启动子、内含子及其间隔区长度不同而产生多态性[1]。该标记自2001年提出后，因其成本低、引物通用性强、多态性高、重复性好等诸多优点，在植物分子育种研究中应用广泛[2]。青花菜在我国的栽培时间较短，国内可供利用的育种材料有限，对青花菜种质资源鉴定评价等方面研究较少，因此笔者对搜集到的部分青花菜早中熟种质资源进行SRAP遗传多样性分析，从DNA水平上揭示其部分遗传信息和亲缘关系，以期为青花菜早中熟种质资源的搜集、鉴定与利用研究提供一定的理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　以本研究所保存的12份青花菜早中熟种质资源为试验材料，进行常规田间管理。材料编号及相关信息见表1。 　　1.2基因组DNA提取 　　采用改良CTAB法[3]提取幼嫩叶片基因组DNA，经 1.0% 琼脂糖凝胶电泳检测后，稀释成浓度为15 ng/μL的工作液，超低温冰箱保存备用。 　　1.3SRAP扩增和电泳检测 　　试验选用了4个正向引物和12个反向引物（表2）。以基因组DNA为模板进行PCR扩增， 反应体系（16 μL）：15 ng 　　扩增产物加入溴酚蓝后，吸取2 μL进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。60 V预电泳0.5 h，120 V稳压电泳1.5～2.0 h。电泳结束后用AgNO3进行染色：0.5%冰乙酸与10%乙醇混合水溶液固定15 min；2 g/L AgNO3水溶液银染 10 min；去离子水冲洗3次后，用含12 g/L NaOH、0.6%甲醛、0.02 g/L Na2S2O3的显色液显色至条带清晰后拍照[4]。 　　1.4数据处理 　　统计电泳检测结果并进行赋值，样品同一位置有电泳条带则赋值为1，无则赋值为0；强带和弱带均赋值为1。根据F值大小按不加权成对群算术平均法（unweighted pair group method with arithmetic means cluster analysis，UPGMA）进行遗传聚类分析，并绘制亲缘关系树状图。 　　2结果与分析 　　2.1青花菜SRAP扩增结果 　　本试验从48个SRAP引物组合中，筛选出28个可稳定扩增、多态性较好的扩增引物组合。对12份早中熟青花菜种质进行扩增，28对引物组合共检测到312条清晰扩增条带，其中多态性条带为227条，多态性为75.76%。每对引物组合扩增的等位基因数差异较大，从2至22个不等，平均每对引物组合扩增数为11.14个，表明所选青花菜种质间具