芳基丙酸类非甾体抗炎药物抗坏血酸酯化衍生物的酶法合成研究-微生物与生化药学专业论文.docxVIP

咄咄咄呻A··州 咄咄咄呻A·· 州 附肌肉，伽 mmnu 川川川码，h 川川州民材 川川川oo mmma吨， 恻Y 摘要 本文以酣洛芬和 L-抗坏血酸为原料，以脂肪酶 Novozym 435 为主要催化剂，对其 酶法合成进行研究。结果表明，酣洛芬能与 L抗坏血酸发生酣化反应，得到 L抗坏血 酸酣洛芬酣(酣洛芬维 C 酶)。在合成的过程中使用高效液相色谱·紫外检测法、腆滴定法 分析非水相酶侃反应合成产物中的酣洛芬维 C 醋。该方法具有快速、准确、简便等特点。 研究了三种芳基丙酸樊非简体抗炎药物 b抗坏血酸衍生化的合成工艺，并对反应条 件进行优化。首先，对二三种脂肪酶进行筛选:然后，建立了反应初速度的判定方法:最 后，分别考察了底物浓度、不同溶剂、酶质量分数、反应温度、摇床转速对反应初速度 的影响。结果表明: Novozym 435 和 TLIM 能够催化反应井获得目标产物。通过比校， 发现在单位时间内 Novozym 435 催化的反应产物生成最高于 TLIM 催化的反应。最终以 反应初速度为判定栋准，实验确定了反应的最佳工艺条件。 对于特定的酶催化反应体系，研究酶的反应动力学十分重要。本文从研究浓度因素 的有关实验求出速度常数，研究了酶促有机合成 b抗坏血酸洛芬酷的反应动力学，并确 定了酶促反应动力学参数。结果我明:三种底物中，布洛芬与酶的亲和力最大，嗣洛芬 次之，氟比洛芬最小。并且发现以布洛芬和嗣洛芬为底物的酶促反应中，存在底物抑制 作用。通过建立单底物抑制模型，求得底物抑制反应中的抑制常数及功力学常数。 从热力学角度看，白于酶和反应物形成了络合物，降低了反应的活化能，促进了反 应空进程。酶能够促进生化反应的速率，但不能改变皮应方向和化学平衡。本文研究了酶 促反应的平衡时间、平衡产物浓度，计算得到酶促反应热力学平衡常数，井垮察了 Novozym435 脂肪酶的稳定性。结果表明 z 布洛芬与 L抗坏血酸成酶的最优条件:转速 200 r/min ，温度65 .C ，加酶量5%( 以底物的质量分数计)，底物浓度 1000 mmol/L 平 衡所需时间 66 h ，lJl衡时产物质量分数为 19.07%; 酣洛芬与 L抗坏血酸成酶的最优条 件: 200 r/min ，60.C ，加酶最7.5%，底物浓度600 mmol/L，平衡时间 132 h ，质最分数 为 10.63%; 氟比洛芬与 L抗坏血酸成酷的最优条件: 200 r/min ，65 C，加酶量 5%，底 物浓度 400 mmol瓜，平衡时间 144 h ，质量分数为6.76%。对底物进行了比较，得到了 各自的动力学与热力学参数。布洛芬 z 米氏常数 Km=O.lOI Jlmol瓜， vm=32.68 Jlmol/(min g) ，热力学平衡常数K=O.166 ;酣洛芬: Km=O.l44 JlmollL， Vm拟=12.97 Jlmol/(ming) ，K=0.094; 氟比洛芬: Km0.185 Jlmol瓜， Vm拟骂9.35 Jlmol/(min. g)，K=0.055o 关键词:非俑体抗炎药，酶促合成，动力学，热力学，脂肪酶 11 11 Abstract Abstract In this pape民 we have used the ketoprofen and L-ascorbic acid as raw materials，lipase Novozym 435ωthe main catalyst to study the enz归natic synthesis. The result showed that: the ketoprofen could react with L-ascorbic acid and get L-ascorbyl ketoprofen ester (L-AK) product. Here in our synthesis process，we used a method to determine 伽 L-AK quantitatively. High Performance Liquid Chromatography with UV Detector and Iodine titration was tested and optimized.ηlis method is simple，rapid ，and accurate and can be used for the quantitative determination of LAK. The technology of synthesis of the ibuprofen and its derivatives and L-asco