丹参酮ⅡA促血管新生作用的实验研究-老年医学专业论文.docx

独创性声明 本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行研究工作及取得研究 成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密□，在 年解密后适用本授权书。 不保密□。 （请在以上方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 指导教师签名： 日期： 年 月 日 目 录 中英文缩写词 1 中文摘要 2 ABSTRACT 4 正 文 6 前 言 6 材料和方法 8 结 果 18 附 图 21 讨 论 23 结 论 26 参考文献 27 综 述 30 致 谢 38 华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 中英文缩写词 英文缩写 英文全称 中文全称 TsⅡA TanshinoneⅡA 丹参酮ⅡA VEGF Vascular endothelial growth factor 血管内皮细胞生长因子 VEGFR-2 Vascular endothelial growth factor receptor-2 血管内皮细胞生长因子受体 -2 bFGF bovine basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞生长因子 EA.hy926 ELISA RT-PCR WB Acetyl-CoA carboxylase Enzyme linked immunosorbent assay Reverse transcription polymerase chain reaction Western-blot 人脐静脉细胞融合细胞 酶联免疫吸附法 逆转录聚合酶链反应法 免疫印迹法 rpm round per minite 转/分 min minute(s) 分钟 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 SDS Sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠 PAGE Polyacrylamide gel eloctrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 Tris Tris(hydroxymethyl) aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 DAB Diaminobenzidine 二甲基联苯胺 TAE Tris/glacial acetic acid/EDTA(buffer) Tris/冰乙酸电泳缓冲液 OD Optical density 光密度 丹参酮ⅡA 促血管新生作用的实验研究 中文摘要 目的： 观察丹参酮ⅡA 对人脐静脉内皮细胞的血管新生作用，并探讨其可能机制。 方法： 体外培养人脐静脉内皮 EA.hy926 细胞，常规培养于 37℃、5%CO2 含 10%灭活胎牛 血清的 DMEM 培养液中，细胞融合 90%时进行传代，每 2-3 天传代一次，将处于对 数生长期的（2-4 代）细胞用于实验。首先应用 MTT 比色法观察不同浓度梯度丹参酮 ⅡA 促进细胞增殖情况并选择合适浓度及培养时间进一步实验。培养细胞分为空白对 照组（只加培养液）、低剂量丹参酮ⅡA 组、中剂量丹参酮ⅡA 组、高剂量丹参酮ⅡA 组、阳性对照组（加入碱性成纤维细胞生长因子 bFGF）。采用酶联免疫吸附法（ELISA） 测定细胞上清液血管内皮生长因子（VEGF）含量，逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR） 实时荧光定量检测 VEGF mRNA 表达量，免疫印迹法（Western-blot）检测细胞中血 管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）蛋白的含量。 结果： 1.0-10 mg/mL 范围内丹参酮ⅡA 均可促进 EA.hy926 细胞增殖，尤以 5.0mg/mL 促增 殖作用最明显（P＜0.05），但培养 24h 与 48h 差异不明显，故后续试验均培养 24h， 浓度设置为低剂量丹参酮ⅡA 组（1.0mg/mL）、中剂量丹参酮ⅡA 组（2.0mg/mL）、高 剂量丹参酮ⅡA 组（5.0mg/mL）。与空白对照组比较，高剂量丹参酮ⅡA 组和阳性对 照组细胞中 VEGF mRNA 升高，VEGF 蛋白水平也有增加，细胞 VEGFR-2 蛋白含量 增加（P﹤0.05）