雌激素对雌鼠慢性高眼压视网膜损伤的保护作用眼科学专业论文.docxVIP

宁夏医科大学硕士研究生学位论文目录 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 目录 V V 目录 前言…………………………………………………………………1 材料与方法…………………………………………………………3 结果…………………………………………………………………8 讨论…………………………………………………………………12 结论…………………………………………………………………22 附图…………………………………………………………………23 参考文献……………………………………………………………26 综述…………………………………………………………………30 综述参考文献………………………………………………………33 致谢…………………………………………………………………35 个人简历……………………………………………………………36 宁夏医科大学硕士研究生学位论文前言 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 前言 PAGE PAGE 10 前言 青光眼是临床上常见的一种以视神经乳头凹陷萎缩、视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）凋亡和视野进行性缺损为特征的不可逆性致盲眼病。病理性高 眼压是病程进展的主要危险因素。临床单用药物控制眼压，并不能很好的阻止青光眼视 功能损害的进程，说明还有许多其他致病因素参与其中，共同导致视功能发生不可逆损 害。其中，神经节细胞的凋亡是青光眼发病机制中的重要危险因素之一，近年来成为研 究的热点。细胞凋亡的诱发受到多种基因共同调控，目前认为与视网膜神经节细胞凋亡 相关的基因有:Bcl-2 基因、bcl-x 基因、bax 基因以及 p53 基因等，其中 bcl-2,bax 最 为典型。研究表明，Bcl-2 是重要的抗凋亡基因，而 bax 则与之相反，是典型的凋亡促 进基因。目前研究认为 bcl-2 和 bax 表达的变化是细胞凋亡的主要分子机制。因此，如 何有效抑制 RGCs 的凋亡，保护 RGCs 的存活，以阻止青光眼视功能发生不可逆损伤的进 程，成为青光眼治疗方面研究的关键[1]。 雌激素是体内一种非常重要的性激素，主要由卵巢生成后，与各个组织的雌激素受 体相结合，通过不同的传导途径，发挥各种生物学效应。雌激素受体除了分布于生殖系 统外，在中枢神经系统，心血管系统，骨骼系统，以及眼部组织都有广泛的分布。近年 研究发现，雌激素除了可以促进生殖系统发育，及维持性生理特征外，还具有营养神经， 保护神经细胞，促进细胞正常增殖分化，维持细胞正常生理功能，抗氧化，抑制细胞凋 亡的作用。已有众多研究表明，雌激素在对神经组织及缺血组织具有明显的保护作用， 那么雌激素是否在青光眼的视网膜损伤中发挥同样的抑制细胞凋亡的作用，此类的相关 研究目前还较少。 本研究通过对去势大鼠制作慢性高眼压模型后，分别于不同组隔天注射高，中，低 浓度雌激素作为保护剂。连续注射 8 周后过量麻醉处死，用放射免疫分析法测定血清中 雌激素水平，将大鼠眼球制作石蜡切片，行 HE 染色观察视网膜各层情况，同时行 RGCs 计数，比较各组 RGCs 数目增减趋势。行免疫组化染色观察各组大鼠视网膜 bcl-2 蛋白 及 bax 蛋白的表达变化及趋势。探讨雌激素对慢性高眼压模型大鼠视网膜损伤的保护作 用及可能的机制，并研究观察不同浓度雌激素保护作用的程度趋势。为青光眼视功能损 伤的治疗提供一些新的思路。 宁夏医科大学硕士研究生学位论文材料与方法 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 材料与方法 材料与方法 1 材料 1.1 实验动物及分组 健康成年 SD 雌性大鼠 50 只(宁夏医科大学实验动物中心提供)，体重 200--250g， 2.5-3 月龄。大鼠随机分为 5 组：Ⅰ组~Ⅴ组各组均为 10 只动物。Ⅰ组为正常组，Ⅱ组 对照组（去势+高眼压模型），Ⅲ组-Ⅴ组为实验组，其中Ⅲ组（去势+慢性高眼压模型+ 低浓度雌激素注射），Ⅳ组（去势+慢性高眼压模型+中浓度雌激素注射），Ⅴ组为（去势 +慢性高眼压模型+高浓度雌激素注射）。所有大鼠共处一室，在标准大鼠饲养笼（宁夏 医科大学附属医院外科学研究室提供）进行饲养。温度控制在 23℃。实验前检查所有实 验大鼠无眼疾，连续测量眼压 3 d，1 次/d，进行区间估计，剔除平均眼压高于或低于 正常眼压区间者。 1.2 实验试剂及主要设备与仪器 1.2.1 实验所需试剂： 17-β雌二醇 美国 sigma 公司产品 雌二醇放射免疫分析试剂盒 北京北方生物技术研究所 Bcl-2 兔多抗 IgG、Bax 兔多抗 IgG 美国 Santa Cruz 公司 PV-9000 二步法免疫组化检测试剂盒 北京中山生物公司 DAB 显色试剂盒 北京中山生物公司 中性树胶 中国上海标本模型厂 0.01M/0.1