成体神经再生及轴突病变研究-法医病理学专业论文.docx

成体神经再生及轴突病变研究 华中科技大学同济医学院法医学系 研究生：周 鑫 导 师：周亦武 摘 要 应激是成体海马神经再生最强有力的抑制因子之一,这已在多种哺乳动物得到证实,比如小 鼠、大鼠和绒猴等。尽管应激抑制神经再生的效应众所周知，但确切机制未明。 本文在成功构建大鼠大脑中动脉闭塞缺血模型的基础上,首先研究了脑缺血后应激激素皮 质酮水平的变化对海马、室管膜区等主要神经生发区及脑皮质糖皮质激素受体表达、分布的影 响，以及由此所引起的神经再生的改变，以揭示成体神经再生受糖皮质激素水平调控的可能机 制。 通过选取9-10周龄成年wistar大鼠，使用线栓法致其大脑中动脉闭塞0.5小时，脑缺血损 伤诱导成功后重复腹膜下注射细胞增殖特异性标记5-溴脱氧尿苷,灌流大鼠前取心血、分离血 清检测皮质酮水平,鼠脑切片应用多种免疫染色方法(单标及双标),检测GR及新生神经细胞的 变化。 结果发现正常大鼠血清皮质酮水平稳定，皮质、室管膜及海马仅有少量 BrdU﹢、Nestin﹢ 和 DCX﹢单标/双标细胞散在。MCAO 术后大鼠血清皮质酮水平逐渐升高，3 周达峰值，此时，大 脑皮质、室管膜及海马 GR+细胞数量最低；BrdU﹢、Nestin﹢和 DCX﹢单标/双标细胞数量在脑 缺血后第 1、2 周显著增加，MCAO 术后第 3 周时数量明显减少,第 4 周时主要散布于缺血侧皮质 和室管膜。假手术组大鼠血清皮质酮水平术后即明显升高，其后逐渐降低，第 3 周时接近正常 水平；假手术后第 1、2 周， GR﹢细胞正常分布，皮质、室管膜及海马可见一定数量的 BrdU﹢、 Nestin﹢和 DCX﹢单标/双标细胞存在；第 3 周时皮质、室管膜及海马 GR﹢细胞数量减少，而 BrdU ﹢、Nestin﹢和 DCX﹢单标/双标细胞数量较多。 MCAO大鼠血清皮质酮水平逐渐升高，GR+细胞数量减少，神经再生受抑制，说明糖皮质激素 受体受其激素水平负反馈调节是影响成体中枢神经再生的关键因素之一。 假手术对照组大鼠皮 质酮水平虽然快速升高，但GR﹢细胞数量及分布并未受到影响，皮质、室管膜及海马存在一定 数量的神经干细胞/前体细胞及其迁移现象，提示在正常状况下，或许存在某些机制能调节或者 抑制高浓度皮质酮对糖皮质激素受体及神经再生的直接影响。 进一步在大鼠大脑中动脉闭塞缺血模型的基础上, 应用生物素葡聚糖胺（BDA）神经示踪技 术观察并研究脑缺血后时序性的神经细胞轴突病变，探讨脑缺血轴突损伤的特点。在脑缺血损 伤诱导成功后分别于术后第2小时、6小时、24小时,第1-4周断头处死实验Wistar大鼠, 在体神 经示踪组术前72小时脑内注射BDA,离体示踪组则迅速取脑并采用死亡后脑细胞轴突转运功能恢 复方法,注射BDA示踪,无脑缺血病变的正常大鼠作为在体对照及离体对照组。鼠脑标本连续冠状 冰冻切片后使用ABC免疫组织化学方法显色。实验结果显示大鼠脑缺血后出现轴突病变,表现为 轴突肿胀和轴突膨体，受损神经元轴突直径增加，对照组大鼠未发现轴突病变。脑缺血后大鼠 脑轴突的病理改变及其程度、数量与损伤经过时间相联系，呈现出一定的时效性。 文中最后分析了因眼外伤致视神经受损共23例29眼的视觉诱发电位资料，研究伤后不同时 期刺激模式空间频率、P100波幅变化与视神经损伤再生修复之间的联系，探讨将视觉诱发电位技 术应用于视神经损伤再生修复评估的可行性。实验确定刺激模式空间频率及P100波幅作为检测指 标，以志愿合作受检者的视力表视力为参照，记录全部受检眼的实验检测结果，在此基础上， 分析视神经损伤后不同时期视觉诱发电位变化与视神经再生修复之间的关系。结果发现一定的 视觉刺激模式空间频率大小与视神经损伤再生修复表现出一致性，P100波幅与视力水平呈正相关。 视神经损伤后前三个月，再生修复眼视觉诱发电位检测结果呈现动态变化，如视力恢复、刺激 模式空间频率减小及P100波幅增大预示视神经损伤再生修复；若视力减退、刺激模式空间频率增 大（或无变化）及P100波幅减小（或无变化）则提示视神经损伤严重，无明显再生修复。 关键词：脑缺血；糖皮质激素受体；调节；神经再生；神经示踪；轴突病变；损伤经过时间； 视神经损伤；再生修复；视觉诱发电位 Abstract Stress is one of the most potent inhibitors of adult hippocampal neurogenesis, and has been demonstrated in multiple mammalian species, including the mouse, rat, tree shrew, and marmoset. Although the antineurogenic effec