单基因突变对狼疮模型小鼠的作用及影响-儿科学专业论文.docx

摘 摘 要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 遗传因素在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)及狼疮性肾 炎(lupus nephritis,LN)的发生发展中起着重要的作用，但目前其遗传学改变与疾 病状态之间的具体关系仍未阐明。为明确单个基因突变对疾病产生的作用及影 响，我们研究了 Faslpr 小鼠及 Fas+小鼠——两种遗传背景相同，但 Fas 基因型不 同的 SLE 模型小鼠。通过对小鼠活体及离体器官的成像，研究基质金属蛋白酶 (MMPs)、趋化因子受体 4(CXCR4)、白介素 11(IL-11)等分子标记物在 SLE 模型 小鼠体内的表达及分布，并结合肾脏病理及相关尿液、血清学改变，进一步从 分子水平探讨单个基因突变对 SLE 乃至 LN 的影响及作用机制，为今后 SLE、 LN 的早期诊断及分子化靶向治疗提供新的思路。 方法： SPF 级 MRL/MpJ-Faslpr/J 小鼠及其亲本对照 MRL/MpJ 小鼠(雌性，2-4 月 龄，体重 18-30g，购自 The Jackson Laboratory，Bar Harbor, ME)各 10 只； MRL/MpJ-Faslpr/J 小鼠为实验组(A 组)，其亲本对照 MRL/MpJ 小鼠为对 照组(B 组)，按月龄大小分别设置为 2(n=3)、3(n=3)、4(n=4)月龄组； (3)小动物多模式活体成像显示 MMPs、CXCR4、IL-11 在两组不同品系 SLE 模型小鼠体内的表达及分布情况；酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同月龄小鼠血 清中 MMP-2、MMP-9、抗 ds-DNA 抗体、补体 C3 的表达水平以及尿白蛋白、 尿肌酐的表达水平；HE 染色评价肾脏病理改变情况；免疫组织化学 EnVision 法观察 MMP-2、MMP-9、CXCR4 在小鼠肾脏中的表达情况。 结果： (1)活体成像及离体器官成像结果显示，MMP 信号主要来自于 Faslpr 小鼠的 肾脏组织，且信号强度显著高于 Fas+小鼠(P0.01)；IL-11 在 Faslpr 小鼠肺组织的 信号强度显著高于 Fas+小鼠(P0.01)；IL-11 在 Faslpr 小鼠膝关节中的信号强度显 著低于 Fas+小鼠(P0.05)；CXCR4 在 Fas+小鼠肝脏中的信号强度显著高于 Faslpr 小鼠(P0.01)； (2) Faslpr 小鼠血清抗 ds-DNA 抗体水平显著高于 Fas+小鼠(P0.01)；Faslpr II 小鼠及 Fas+小鼠在 2 月龄时均表现出较高水平的血清补体 C3，而 4 月龄时 C3 水平均显著降低(Faslpr P=0.0136; Fas+ P=0.0218)；两组小鼠在 2 月龄至 4 月龄时 尿白蛋白、尿肌酐水平均显著升高(Alb Faslpr P=0.0279, Fas+ P=0.0309; UCr Faslpr P=0.0001, Fas+ P=0.0043)，且 Faslpr 小鼠尿蛋白升高的水平较 Fas+小鼠更为显著； Faslpr 小鼠尿蛋白/尿肌酐比值(albumin creatinine ration, ACR)较 Fas+小鼠相比， 随年龄增加表现出显著的升高(Faslpr P=0.0395; Fas+ P=0.0307)； (3)Faslpr 小鼠 2 月龄血清 MMP-2 的水平显著高于 Fas+小鼠(P0.05)，两组小 鼠血清 MMP-2 水平均随月龄的增加而升高(P0.01)，Faslpr 小鼠血清 MMP-9 的 表达水平随年龄的增加而显著升高(P0.01)；免疫组织化学结果示，Faslpr 小鼠 及 Fas+小鼠肾脏组织中均可检测到 MMP-2、MMP-9、CXCR4 蛋白的表达，Faslpr 小鼠肾脏组织中 MMP-9 蛋白的表达水平随疾病进展逐渐升高。 结论： (1)遗传背景相同，但 Fas 基因型不同的两组 SLE 模型小鼠中，Faslpr 小鼠体 内 MMP、IL-11 分别在其肾脏、肺组织中存在高信号，Fas+小鼠则表现出 IL-11、 CXCR4 高信号分别在其关节、肝脏组织中，提示 Faslpr 趋向于引起内在器官(如 肾脏、肺组织)的损害，而 Fas+基因则更趋向于引起关节的损害，展示了炎症性 疾病的不同模式，并证实了单个基因突变在 SLE 疾病过程中的作用、疾病的复 杂性及个体化分子靶向疗法的必要性； (2)Faslpr 小鼠及 Fas+小鼠在 2 月龄时均表现出较高水平的血清补体 C3，而 4 月龄时 C3 水平均显著降低；两组小鼠在 2 月龄至 4 月龄时尿白蛋白、尿肌酐水 平均显著升高，且 Faslpr 小鼠尿蛋白升高的水平较 Fas+小鼠更