超小超顺磁性氧化铁颗粒标记内皮祖细胞的大鼠缺血性脑卒中模型MR活体示踪分析-影响医学与核医学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 2 PAGE PAGE 13 中 英 文 缩 写 词 对 照 缩 写 英文全称 中文全称 EPCs endothelial progenitor cells 内皮祖细胞 USPIO ultrasmall superparamagnetic iorn oxide  超小超顺磁性氧化铁 TA transfection agent 转染剂 PLL poly-L-lysine 多聚赖氨酸 MRI magnetic resonance imaging 磁共振成像 TE echo time 回波时间 TR repetition time 重复时间 TI invertion time 反转时间 FOV field of view 视野 T2 transverse relaxation time 横向弛豫时间 R2 relaxation rate 弛豫率 FA flip angle 翻转角 PBS phosphoric buffer solution 磷酸缓冲液 MVD microvessel density 微血管密度 超小超顺磁性氧化铁颗粒标记内皮祖细胞的大鼠缺血 性脑卒中模型 MR 活体示踪研究 摘 要 研究背景与目的 脑缺血性疾病是一类严重危害人类健康的疾病，发病率、致残率、死亡率高， 仅超急性期溶栓治疗效果较确切，但有效治疗时间窗很窄（6 h），大多数患者难 以得到及时治疗，且溶栓治疗有并发颅内出血的危险。脑缺血后新生血管的形成、 重塑是功能恢复和神经再生的基础, 随着对血管形成机制的深入研究，“治疗性血 管新生”的概念为缺血性疾病的治疗提供了新思路。血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)出生后主要存在于骨髓，在某些情况下可以被动员到外周血， 向靶组织归巢参与生理或/和病理性血管形成。本实验旨在利用磁共振活体示踪法 并结合病理学分析证实骨髓来源的内皮祖细胞能定向迁移到大鼠脑缺血性损伤部 位并参与新生血管的形成。 材料和方法 SD大鼠，雄性，90g~110g。收集股骨、胫骨和肱骨骨髓液，利用淋巴细胞分 离液分离出单核细胞，采用贴壁生长法分离、培养细胞，并用免疫荧光及免疫组 化技术检测细胞CD133、CD34及KDR的表达，Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1双荧光染 色鉴定细胞。以多聚赖氨酸（PLL）为转染剂、用USPIO对培养成功的内皮祖细胞 进行磁性标记，USPIO浓度为25μg/ml，与PLL最佳比例为1：0.03。雄性SD大鼠20 只，250-300g，建立大鼠大脑中动脉阻塞模型（tMCAO），然后将磁性标记内皮祖 PAGE PAGE 10 PAGE PAGE 5 细胞（实验组）及PBS（对照组）分别经鼠尾静脉移植入tMCAO模型大鼠，于移 植前和移植后1d、2d、3d、5d、7d行神经功能损伤评分并进行MRI扫描，随后取脑 组织标本石蜡包埋行普鲁士蓝染色及 免疫组织化学染色检测 CD34 、 KDR(VEGFR-2)及CD68的表达。测定微血管密度，对神经功能损伤评分、梗塞相 对体积变化比值和微血管密度行统计学分析。 结果 成功从大鼠骨髓中分离、培养出内皮祖细胞并鉴定成功。利用USPIO-PLL作 为细胞内对比剂可以高效标记内皮祖细胞，标记率大于98%，细胞活性无影响。 MRI扫描于T2WI及T2*map序列下，脑梗塞区与正常脑组织交界处可观察到低信号， T2*map序列下显示更为明显。普鲁士蓝染色显示蓝染细胞位置与磁共振扫描所示 低信号位置相对应。普鲁士蓝染色及免疫组化检测CD34、VEGFR-2提示磁性标记 EPCs迁移至脑梗塞区后参与血管形成并分化成为血管内皮细胞。造模成功7d、9d 神经功能损伤评分示实验组大鼠损伤积分低于对照组，差异具有统计学意义 （ P0.05 ）；细胞移植 7d 后两组间梗塞相对体积变化比值无明显统计学差异 （P0.05）；微血管密度测定显示实验组大鼠脑缺血损伤区血管密度明显高于对照 组，差异具有统计学意义(P0.05)。 结论 MRI可用于活体示踪磁性标记内皮祖细胞的定向迁移至大鼠脑缺血损伤区中 的分布，结合组织学分析，证实内皮祖细胞参与脑缺血损伤区新生血管形成并促 进神经功能恢复。 关键词 内皮祖细胞 超小超顺磁性氧化铁 磁共振成像 脑缺血 In Vivo MRI Tracking of Endothelial Progenitor Cells Labeled with Ultrasmall Superparamagnetic Iron Oxide in Rat Model of Cerebral Ischemia ABSTRACT BACKGROUNDS AND OBJRCTIVES S