雌激素降低慢性低灌注后血管-神经元损伤及其机制-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解河北联合大学有关保留 、使用学位论文的规定， 即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文 ，学校有权保 留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。 作者及导师同意论文公开及网上交流的时间： □ 授学位之日起 □ 自 年 月 日起 作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘 要 摘 要 目的 通过制作雌性去势大鼠双侧颈总动脉永久结扎（Bilateral Common Carotid Artery Occlusion，BCCAO）模型，观察大鼠脑慢性低灌注不同时期各组神经血管 单元（Neurovascular Unit，NVU）的损伤情况，探索长期生理剂量雌激素（17-β- estrodiol，E2）替代治疗介导的多靶点的神经血管单元的保护作用并探讨其可能的 分子机制，为临床上由于慢性低灌注引起的血管性痴呆等提供新的治疗策略。 方法 1 制作雌性去势大鼠 BCCAO 实验动物模型：采用 SPF 级成年雌性 SD 大 鼠，体重 280~300g，行双侧卵巢切除术（OVX）一周后制作分阶段双侧颈总动脉 永久结扎模型，实验动物随机分为慢性低灌注早期组：sham，BCCAO（6h、1d、 3d、7d），BCCAO 3d+安慰剂，BCCAO 3d+E2 和慢性进展期组：sham 3m， BCCAO 3m，BCCAO+安慰剂，BCCAO 3m+E2。2 采用伊文氏兰（Evans Blue， EB）和荧光素钠（NaF）染色技术观察大鼠 BCCAO 后染料向组织的渗漏，采用 Western blot 技术检测大鼠皮质区及海马区紧密连结蛋白 ZO-1、Occludin 的表达水 平变化以评估血脑屏障损伤状况及程度。3 采用免疫组织化学技术检测各组大鼠大 脑皮质及海马区血管 IgG 的渗漏程度，以观察 BCCAO 后不同时期各组大脑微血管 的损伤情况。4 采用免疫组织化学技术检测各组大鼠大脑皮质及海马区血管形态及 血管密度的变化，以探求 BCCAO 后不同时期血管的病理发展变化。5 采用透射电 镜技术观察不同时期各组海马神经血管单元损伤的超微结构。6 Western blot 技术 检测血管内皮细胞生长因子 VEGF、神经元骨架蛋白 MAP2 的表达及雌激素的作 用。7 激光共聚焦扫描显微镜技术观察 BCCAO 后不同时期神经元及星形胶质细胞 的变化及 VEGF 的免疫定位以及 E2 的作用。 结果 1 慢性低灌注早期血脑屏障通透性显著增加。EB 和 NaF 渗漏于 BCCAO 后 1d 开始显著增加（P0.05），并于 3d 达到高峰，7d 显著下降，但仍高于 sham 组。2 大脑慢性低灌注早期通过影响紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin 的表达破坏血 脑屏障的完整性。Western blot 结果显示 BCCAO 3d 时间点，与相对应时间点 sham 组相比，海马及皮质 ZO-1、Occludin 表达水平显著下降（P0.05）。3 IgG 免疫组 织化学染色结果显示：与相应 sham（3d 或 3m）组相比，BCCAO 后 3d、3m 组皮 层和海马 CA1 区可见大量损伤的血管被 IgG 免疫染色包围；与 BCCAO 3d 组相 比，海马 CA1 区 BCCAO 3m 组 IgG 在血管周围的染色较弱。给予 E2 处理均可显 著降低血管 IgG 的渗漏；4 BCCAO 后微血管密度的变化以及雌激素的保护作用。 - I - 河北联合大学硕士学位论文 采用 RECA-1 免疫组织化学染色法结果显示：皮质及海马 CA1 区 sham（3d 和 3m）组 50~500 大小的血管较少，而 BCCAO 组（3d、3m）小血管的数量显著增 加，雌激素处理组显著降低 BCCAO 处理后小血管的数量。像素大于 2001 的血管 数目于 BCCAO （3d、3m）后显著降低（P0.05），生理剂量雌激素替代治疗可 有效增加大血管密度 （P0.05）。5 BCCAO 后神经血管单元损伤的超微结构以及 长期生理剂量雌激素替代的保护作用。实验动物各组大鼠海马超薄切片经透射电镜 扫描后发现：BCCA