磁性聚乙撑亚胺的制备和细胞转染的实验研究-儿科学专业论文.docxVIP

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 PEI Polyethylenimine 聚乙烯亚胺 PLL Polylysine 多聚赖氨酸 PEI-PLL Polyethylenimine- Polylysine 聚乙撑亚胺 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 MTDS Magnetic targeted drugs delivery system 磁性靶向给药系统 SPIONs Superparamagnetic iron oxide nanoparticles 超顺磁性氧化铁纳米粒子 Kana Kanamycin 卡那霉素 TEM Transmission electron microscope 透射电镜 Sulfo-NHS N-Hydroxysulfosuccinimide sodium salt N-羟基硫代琥珀酰亚胺 CCK-8 Cell Counting Kit-8 细胞增殖与毒性检测试剂盒 DMEM Dulbeccos Modified Eagle Medium DMEM DDSs Drug Delivery Systems 药物传递系统 NPs Nanoparticles 磁性纳米粒子 PET Positron-emission tomography 正电子发射计算机断层显像 SPECT Single-Photon Emission Computed Tomography 单光子发射计算机断层成像 术 PEG Polyethylene glycol 聚乙二醇 FDA Food and Drug Administration 食品药品监督管理局 1 磁性聚乙撑亚胺的制备和细胞转染的实验研究 摘 要 目的：用超顺磁性氧化铁纳米粒修饰聚乙撑亚胺，对产物进行表 征，探讨超顺磁性聚乙撑亚胺携带基因的能力、转染细胞的效率及对 细胞活性的影响。 方法：1. 聚乙撑亚胺与超顺磁性 Fe3O4 纳米粒按一定比例振荡孵 育后配制成磁性聚乙撑亚胺，并对其原子排布、粒径大小、Zeta 电位 等进行表征；pAd-Track 质粒通过化学转化法导入感受态大肠杆菌内 并进行扩增和提取，将磁性聚乙撑亚胺与质粒按不同的比例进行结合， 通过凝胶电泳探索二者最佳结合比例，并用原子力显微镜对复合产物 的原子排布进行描述，Zeta 电位检测复合产物携带电荷情况。 2. 将 293 细胞根据不同的转染材料进行分组：1）磁性聚乙撑亚胺 + pAd-Track ，2）非磁性聚乙撑亚胺+ pAd-Track，3）GoldenTransfer + pAd-Track，4）PolyMAG+ pAd-Track，每组分别设置有磁场和无磁 场处理的对照，倒置荧光显微镜下分别于转染后 24h、48h、72h 观察 各组细胞荧光表达情况，流式细胞仪定量检测转染 24h 后各组载体的 转染率；CCK8 试剂盒检测各组载体对细胞生长活性的影响。 结果：1. （1）四氧化三铁纳米粒呈黑色或灰色粉末状，粒径大小 为 9-11nm（TEM），磁感应强度（magnetization）45 emu/g；磁性聚 乙撑亚胺；原子力显微镜检测结果提示：磁性 Fe3O4 纳米粒上接了一 个 18 个碳原子的碳链，再用 N-羟基硫代琥珀酰亚胺修饰，而聚乙撑 2 亚胺通过氨基与磁性 Fe3O4 纳米上的 N-羟基硫代琥珀酰亚胺结合， 形成磁性聚乙撑亚胺。磁性聚乙撑亚胺粒径大小约 10~30nm，携带正 电荷约+50mV；（2）凝胶电泳结果显示磁性聚乙撑亚胺的比例越高， 结合的质粒越多，当二者体积：质量比达 10:1 时，磁性聚乙撑亚胺能 够完全结合质粒，原子力显微镜提示磁性聚乙撑亚胺的结构结尾有一 个氨基连接了数个五元环结构，说明磁性聚乙撑亚胺通过氨基与质粒 结合,Zeta 电位检测复合物带有正电荷，约+22.5mV。 2. （1）转染 24 小时，荧光显微镜观察发现，磁性聚乙撑亚胺及 非磁性聚乙撑亚胺组荧光表达 量与商品化的转染试剂 GoldenTransferTM-D 表达量相当，而磁性转染试剂盒 PolyMAG 组荧光 表达量相对较低；转染 48 小时磁性及非磁性聚乙撑亚胺组的荧光表达 量明显增多，而 GoldenTransferTM-D 组的转染量较前两组增加量相对 较少，PolyMAG 组的荧光亦有少量增加；转染 72 小时，磁性聚乙撑 亚胺及非磁性聚乙撑亚胺组荧光表 达量相当，在几组中最高， GoldenTransferTM-D 组其次，PolyMAG 组荧光表达量最低；（2）流式 细胞仪检测结果提示磁性聚乙撑亚胺与非磁性聚乙撑亚胺的转染率相 当，均