芳香维A酸乙酯治疗银屑病作用机制的研究-皮肤病与性病学专业论文.docxVIP

泰山医学院硕士学位论文 泰山医学院硕士学位论文 万方数据 万方数据 芳香维 A 酸乙酯治疗银屑病作用机制的研究 研究生：宋来涛 专 业：皮肤病与性病学 导 师：张开红 教授 中文摘要 背景 银屑病是一种常见的慢性炎症性增生性皮肤病，特征性皮损表现为覆有数层银白 色鳞屑的红色丘疹或斑块。其病因不明，易于复发，严重影响患者的生活质量及身心 健康，多年来，银屑病发病机制一直令人困惑。新的观点认为，银屑病是遗传背景下 的 T 细胞异常的免疫性疾病，银屑病的发病机理与 T 细胞免疫密切相关，异常的 T 细胞功能导致继发性角质形成细胞的过度增生。 维甲酸类药物的问世，开辟了银屑病治疗史上一个新的里程碑。芳香维 A 酸乙 酯是维生素 A 衍生物，属新型的第三代维 A 酸类药物，具有高度的受体选择性，对 银屑病的治疗临床显示较好的疗效，然而芳香维 A 酸乙酯治疗银屑病的具体机制仍 不明确。 目的 本研究拟通过观察芳香维 A 酸乙酯对体外培养的角质形成细胞 COLO-16 的影 响，并借助 EAT 模型，观察芳香维 A 酸乙酯对 T 淋巴细胞的作用情况，初步探讨芳 香维 A 酸乙酯对银屑病的作用机制及药物作用靶点，为临床用药提供一定的相关依 据。 第一部分 芳香维 A 酸乙酯对银屑病角质形成细胞的影响 方法 取 20 只清洁级 SD 大鼠，体重在 230～300g 之间，随机分为实验组和对照组， 每组 10 只，雌雄各半。实验组：大鼠以 10mg/kg/d 剂量灌服芳香维 A 酸乙酯，连续 7 天。对照组：大鼠每天灌服蒸馏水 2ml/次，每日 2 次，连续 7 天。大鼠腹主动脉采 血制备血清。培养角质形成细胞株 COLO-16，实验组加入含药血清，对照组加入正 常大鼠血清，培养 48h 后取出，MTT 法检测细胞增殖率，流式细胞仪检测细胞周期 和细胞凋亡情况。 1 结果 1．含药血清组角质形成细胞 COLO-16 与正常血清组角质形成细胞 COLO-16 相 比存活率是 0. 70±0. 09%，存活率小于 1。 3. 正常血清组角质形成细胞 COLO-16 处于 G0/G1 期、S 期、G2/M 期的细胞比 例分别为 71.25±2.45%、24.41±4.13%、4.33±1.70%，而含药血清组处于 G0/G1 期、S 期、G2/M 期的细胞比例为 83.54±4.38%、15.06±3.86%、1.39±1.01%。含药血清组角 质形成细胞 COLO-16 处于 G0/G1 期的细胞比例均明显高于正常血清组，P 值为 0.021； 处于 S 期、G2/M 期的细胞比例明显低于正常血清组，P 值分别为 0.036、0.027，差 异均有统计学意义（P＜0.05）。 正常血清组角质形成细胞 COLO-16 的凋亡率是 15.14%，含药血清组角质形成细 胞 COLO-16 的凋亡率是 50.75%。差异有显著性（P＜0.05）。 结论 1．芳香维 A 酸乙酯可明显抑制角质形成细胞的增值。 2．芳香维 A 酸乙酯可明显促进角质形成细胞的凋亡。 第二部分 用 EAT 动物模型评价芳香维 A 酸乙酯对 T 淋巴细胞的影响 方法 建立 EAT 模型，将 EAT 大鼠模型随机分为 4 组：EAT 模型组（A 组）、低剂量 治疗组（B 组）、中剂量治疗组（C 组），高剂量治疗组（D 组），每组 8 只。分别用 不同剂量的药物灌胃，一周后取大鼠外周血检测 T 细胞生长率。RT-PCR 检测目的基 因 JAK3mRNA 表达。 结果 1. 芳维 A 酸乙酯对大鼠外周淋巴细胞增值及抑制情况 A 组至 D 组大鼠 T 淋巴细胞活性分别为 71%、65%、35%、23%；细胞抑制率为 29%、35%、65%、77%。其中 A、B 组两组 T 细胞活性及细胞抑制率比较无统计学 意义，C 组、D 组大鼠 T 淋巴细胞活性和抑制率与 A 组大鼠比较均有统计学差异（P ＜0.05）。 2. 目的基因 JAK3mRNA 表达 药物对大鼠 JAK3 基因的表达呈现下调作用，A、B 组对 JAK3 目标基因浓度比 较无统计学差异，C、D 两组 JAK3 的表达明显下降，与 A 组比较有统计学差异（P 2 ＜0.05）。 结论 1、中剂量及高剂量芳香维 A 酸乙酯对 EAT 大鼠模型体内 T 淋巴细胞的生长有 抑制作用； 2、中剂量及高剂量芳香维 A 酸乙酯下调 EAT 大鼠模型体内 JAK3mRAN 的表达。 关键词：银屑病；芳香维 A 酸乙酯；作用机制 3 THE STUDY OF THE MECHANISM OF AROMATIC ARETINOIC ARETINOIC ACID ETHYL ESTER USED IN THE TREATMENT OF PSOR