表皮生长因子受体信号通路人子宫内膜癌移植瘤孕激素耐药机制中的作用-妇产科学专业论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 第一部分 人子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型的建立 及其生物学特性的研究 以裸鼠为载体建立的各种人类肿瘤模型是研究肿瘤生物学性状和诊疗方法 的重要工具，随着对肿瘤微环境的深入研究，学者们发现，将人癌细胞悬液或 组织学完整的人癌组织移植至受体动物体内，形成皮下或原位移植瘤模型将能 更客观地模拟肿瘤在人体内的浸润及转移特性[30]。在本部分实验中，我们拟建 立子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤孕激素耐药模型，并对其生物学特性进行检测， 为进一步研究人子宫内膜癌孕激素耐药机制的体内实验和临床研究奠定基础。 1. 材料与方法 材料 1.1.1 细胞株及动物来源 (1) 细胞株来源：人子宫内膜癌孕激素敏感型细胞株 Ishikawa 由广州中山大 学附属第三医院惠赠，为分化较好，ER、PR 呈阳性表达，EGFR 呈低 表达的细胞株 [31] ；人子宫内膜癌孕激素不敏感型细 胞株 Ishikawa-pLWERNL 是一转染了携带 EGFR 基因的 pLWERNL 质粒的细 胞株，为本实验小组于 2008 年建立的一 Ishikawa 细胞亚系，为 PR-B 呈低表达，EGFR 呈稳定过表达的细胞株[28]。 (2) 动物来源：BALB/c（nu/nu）纯系裸鼠，雌性，4~6 周龄，体质量 16~18g， 由中国科学院上海实验动物中心提供，动物生产许可证号码为 SCXK （沪）2007-0005，使用许可证号码为 SYXK（沪）2006-0010。 1.1.2 主要试剂及耗材 (1) 细胞培养用胎牛血清（杭州四季青公司） DMEM-F12 培养基（Hyclone，USA） 胰蛋白酶（Gibco，USA） G418 （Gibco，USA） (5) HEPES （上海润城生物科技有限公司） 75cm2 培养瓶（Corning，USA） 0.22μm 一次性滤器 （Millipore，Switzerland） Eppendorf 管 （Axygen，USA） (9) 血球计数板 （上海求精生化制剂仪器有限公司） (10)1mL 注射器 （山东威高集团医用高分子制品股份有限公司） (11)无菌隔离衣 （上海六谷科技发展有限公司） (12)一次性口罩、帽子 （吴江亿成医疗器械有限公司） (13)无菌橡胶手套 （上海华新医材有限公司） (14)二甲苯 （北京化学试剂公司） (15)无水乙醇 （北京化学试剂公司） (16)改良型苏木素 （北京康为世纪生物科技有限公司） (17)中性树胶 （北京康为世纪生物科技有限公司） (18)伊红 Y 染色液 （北京康为世纪生物科技有限公司） 1.1.3 主要仪器设备 (1) 恒温 CO2 培养箱 （Therom HERAce11150，USA） (2) 超净工作台 （苏州净化设备有限公司） (3) 低速离心机 TDL-40B （上海安亭科学仪器厂） (4) 精密天平（上海精密科学仪器有限公司） 倒置相差显微镜 （Olympus，Japan） 倒置显微镜及显微成像系统 （Olympus，Japan） (7) 恒温水槽 （上海精宏试验设备有限公司） 纯净水机 （Millipore，Switzerland） 微量加样器（Eppendorf，Germany） (10)蜗旋器 QL-901 （江苏海门市麒麟医用仪器厂） (11)蒸汽高压灭菌锅（Biocare DC2002） 1.1.4 试剂的配置及用法 (1) 100mM HEPES 缓冲液 精密天平称取 2.38g HEPES 粉溶于 80mL 无菌蒸馏水中，用 NaOH 调 pH 值到 7.5，补水至 100mL，置于 4℃冰箱避光备用。 (2) G418 液 称取 1g G418 溶于 7.25mL 100mM HEPES 缓冲液中，即成终浓度为 100mg/mL 的 G418。用 0.22μm 一次性滤器过滤除菌，分装于灭菌 Eppendorf 管中，置于-20℃冰箱备用。用前稀释呈所需浓度。 方法 1.2.1 细胞培养及细胞悬液的制备 (1) 细胞培养：人子宫内膜癌孕激素敏感型细胞株 Ishikawa 及孕激素不敏感 型细胞株 Ishikawa-pLWERNL 采用 10%胎牛血清、DMEM-F12 培养基 置于 37℃、5%CO2 培养箱中常规培养；Ishikawa-pLWERNL 细胞在培 养基中另 600μg/mL G418 维持筛选。细胞呈贴壁生长，3~4d 传代一次， 见图 1。取对数生长期细胞用于肿瘤接种。 A：Ishikawa 细胞；B：Ishikawa-pLWERNL 细胞 放大倍数：×100 图 1. Ishikawa 与 Ishikawa-pLWERNL 细胞镜下结构和形态 Figure 1. Cell str