大豆异黄酮提取纯化工艺研究-化学工程专业论文.docx

摘 要 大豆异黄酮是大豆生长过程中产生的一类活性物质，有着广泛的医疗保健作 用。本文对大豆异黄酮的提取、酶解转化及其纯化进行了研究，优化确定了主要 工艺参数，并以剩余豆渣为原料制备了大豆分离蛋白和低聚糖，为大豆的综合利 用提供了有益参考。 首先，通过单因素实验与正交试验或响应面优化，确定了“普通溶剂萃取” 和“超声辅助萃取”两种大豆异黄酮常规提取工艺的最优参数，分别为：普通溶剂 萃取“70oC，80%乙醇，固液比 1:20（g:mL），4h，80 目”，异黄酮提取量为 2099.87μg/g 豆粉，提取率为 85.16%；超声辅助萃取“超声功率 250w，70%乙醇， 固液比 1:15(g:mL)，70oC，2h，80 目”，异黄酮提取量为 2104.25μg/g 豆粉，提 取率为 85.34%。在此基础上进一步设计并优化了新颖的碱醇式提取工艺，其最 佳条件为：pH9.0，80oC，80%乙醇，70min，固液比 1:15（g:mL），80 目，异黄 酮提取量为 2372.25μg/g 豆粉，提取率为 96.21%，结果表明碱醇式提取工艺更加 节能、高效。 其次，利用生物质能源领域的新型酶制剂纤维素酶 GC-220 完成了对糖苷型 异黄酮的水解，使其成功转化为活性更高的异黄酮苷元，其最佳反应条件为： 50oC，pH4.5，加酶量 0.65U/mg 糖苷型异黄酮，4h，酶解率高达 94.8%，得到大 豆异黄酮苷元 1398.00μg/g 豆粉，证明廉价的纤维素酶 GC-220 完全可以代替较 为昂贵的 β-葡萄糖苷酶，水解转化制备高活性的大豆异黄酮苷元。 再次，设计了操作简便的大豆异黄酮纯化工艺：对于超声辅助萃取产物，经 过碱絮凝酸沉淀、醇沉、乙酸乙酯-水萃取三步纯化制得（1838.00μg/g 豆粉）、 纯度为 62.09%的异黄酮，最终收率 74.54%；对于碱醇式提取与酶解转化产物， 经过醇沉、乙酸乙酯-水萃取、水洗三步纯化制得（1280.00μg/g 豆粉）、纯度为 87.25%的大豆异黄酮苷元，最终收率 80.38%。 最后利用提取异黄酮后的剩余豆渣联产制得分离蛋白（216.25mg/g 豆渣）和 低聚糖（73.75mg/g 豆渣）。全部工艺流程中未使用有毒有害溶剂，并对所使用的 乙醇和乙酸乙酯进行了溶剂回收再用，整个流程无废水和废渣排出。 关键词：大豆异黄酮 提取 酶解 纯化 综合利用 ABSTRACT Isoflavones, belonging to the bioactive substance obtained from soy bean, have obvious effects in the prevention and therapy of many diseases. In this paper, the extraction, biotransformation and purification process of soy isoflavones were studied and optimized. The soy protein isolates and oligosaccharides were simultaneously obtained from soy bean dregs. So the soybean was utilized comprehensively. The extraction conditions of conventional organic extraction and ultrasonic assisted extraction were investigated through single factor experiments and orthogonal experiments or response surface methodology. The extraction amount of isoflavones achieved 2099.87μg/g under the optimal extraction conditions of conventional organic extraction (80% ethanol, solid to liquid ratio 1:20, 70 oC, 4h) extraction yield of isoflavones achieved 85.16% under the optimal extraction conditions., and the extraction amount of isoflavones of ultrasonic assisted extraction was 2104.2