雌激素调控大鼠心肌细胞L型钙通道表达的作用及其机制-药理学专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 主要缩略词表（Abbreviation） 英文缩写 英文全称 中文名称 AP action potential 动作电位 APD action potential duration 动作电位时程 Ca-L L-type calcium channel L 型钙通道 cAMP cyclic adenosine monophosphate 环腺苷酸 CREB cAMP response element binding protein cAMP 反应元件结合蛋 白 CREB ODN decoy CREB-decoy oligonucleotide CREB 圈套寡核苷酸 E2 17 β-estradoil 17β-雌二醇 E2-ER estrogen-estrogen receptor complex 雌激素-雌激素受体复合 物 EAD early afterdepolarization 早后除极 ER estrogen receptor 雌激素受体 ERE estrogen response element 雌激素反应元件 ICa-L L-type calcium current L 型钙电流 IKr rapid component of delayed rectifier K+ current 延迟整流钾电流快速成 分 LQTs long QT syndrome 长 QT 综合征 MAPK mitogen-activated protein kinase 丝裂原活化蛋白激酶 NCX sodium calcium exchange 钠钙交换体 NFAT nuclear factor of activated T cells 活化 T 细胞核因子 NF-κB nuclear transcription factor-κB 核转录因子-κB PKA protein kinase A 蛋白激酶 A PI3K phosphatidylinositol 3-kinase 磷脂酰肌醇 3 激酶 RyR ryanodine receptor 雷诺定受体 TdP torsade de pointes 尖端扭转性室性心动过 速 雌激素调控大鼠心肌细胞 L 型钙通道表达的作用及其机制* 中文摘要 目的 L 型钙通道（L-type calcium channel，Ca-L），广泛存在于各种可兴奋细胞的 细胞膜上，如心肌细胞、骨骼肌细胞、心血管平滑肌细胞、内分泌细胞、神经元 细胞等。它在动作电位平台期的形成和维持以及启动心肌细胞兴奋-收缩耦联中 发挥了极其重要的 作 用。已知 Ca-L 的 功 能 改 变 是 影 响 早 后 除 极 （ early afterdepolarization， EAD）及尖端扭转性室性心动过速（torsade de pointes，TdP） 发生的重要因素。已有的研究显示，雌激素是影响 TdP 易感性的重要因素，可 以通过影响基因表达的机制上调家兔心肌细胞 Ca-L 主要功能亚单位 Cav1.2α1C 表达及 L 型钙电流（L-type calcium current，ICa-L）。本研究旨在进一步探究雌激 素调控 Ca-L 作用的信号转导机制。 方法 （1）用雌激素等不同药物孵育原代大鼠心肌细胞或大鼠心肌细胞株 H9C2 后，采用 Western blot 方法检测蛋白提取物中 Cav1.2α1C 表达的变化。（2）用雌 激素等不同药物孵育大鼠心肌细胞系 H9C2 后，采用 ELISA 或 Western blot 方法 检测蛋白提取物中核转录因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）及磷 酸化 cAMP 反应元件结合蛋白（phosphated cAMP response element binding protein，p-CREB）活性水平的变化。（3）设计合成 CREB 圈套核苷酸。利用 oligofectamine 转染试剂将 CREB 圈套核苷酸转染入 H9C2 细胞内，用雌激素刺 激后，采用 Western blot 观察 Cav1.2α1C 蛋白水平的变化。（4）利用主动脉逆流 灌注及 2 型胶原酶消化的方法，得到单个的原代家兔心室肌细胞。根据实验设计， 给予原代家兔心室肌细胞或大鼠心肌细胞株 H9C2 雌激素等不同药物刺激。在电 压钳模式下利用全细胞膜片钳技术记录 ICa-L。 结果 （1）与对照组相比，雌激素（1~100 nM）孵育 24 h 后可剂量依赖性的显著 增加 H9C2 细胞的 ICa-L 的电流密度（p 0.05）和 Ca