压缩气体微生物检测技术改进.doc

压缩气体微生物检测技术改进 　　摘要：为了真实、准确、有效的掌握啤酒灌装各环节压缩气体的微生物情况，通过实验与传统气体检测法――平皿接触法，和目前所使用的水吸收法进行对比，摸索出一种既简单又经济的方法――套袖法。平皿接触法容易受到外部各种环境的干扰，造成各项微生物指标误差较大。水吸收法在气流调节不稳定的情况下，气体中的微生物有可能不会全部滞留在生理盐水中，使检测结果偏低，不能有效的反应出真实情况。套袖法是用一个类似套袖的一端宽一端窄的布袋，套在取样口上，起到了暂时与外界环境隔离的作用。使管路中的空气直接沉降在平皿上，而免受外部环境的干扰。 　　关键词：压缩气体 套袖法 平皿接触法 水吸收法 　　0 引言 　　啤酒酿造过程中的压缩气体是微生物污染的主要途径之一，通过麦汁充氧、二氧化碳备压等环节可以将部分微生物带入啤酒之中。因此，必须定期对无菌空气、氮气、二氧化碳进行检查，以提供必要的参考数据，减少污染。目前，国家没有一个统一的压缩气体检测标准，每个啤酒厂只能根据原理制定检测方法，但有的很难准确地定量检测压缩气体的含菌量。 　　我们所接触过检测气体微生物的方法有四种：平皿接触法、气体取样器法、NBB-B吸收富集法、水吸收法。在日常检测过程中使用的方法分别是平皿接触法和水吸收法。如何更加真实、准确的反应压缩空气的微生物各项指标，有效的检测方法是至关重要的。通过与目前使用的几种方法进行实验对比，我摸索出一种既简单又经济的方法――套袖法。 　　1 实验器材及试剂 　　1.1 实验器材：压缩气体收集装置、环境空气取样器、真空抽滤系统、培养皿、自制棉布套袖、无菌过滤膜、厌氧罐、生化培养箱。 　　1.2 试剂：培养基、0.85%生理盐水 　　2 常用压缩气体的检测方法 　　2.1 平皿接触法 　　该法是比较传统、原始的检测方法。 　　实验步骤：将培养基水浴后于55℃倒入无菌平皿中，倒置几小时去除表面水分后待用。将气体取样口灭菌后调节气体流速，置平皿于取样口下方，让平板培养基暴露在气体流中，旋转使培养基的所有表面与气体流接触，气体均匀沉降于培养基上2分钟。直接置37℃恒温培养2天，进行菌落计数，即为2分钟气体含菌量。 　　2.2 水吸收法 　　该方法是目前日常工作中正在运用的取样方法。 　　实验步骤：配置0.85%的生理盐水200ml于取样瓶中包裹灭菌待用。待气体取样口灭菌后调节气体流速后，将取样瓶上方的胶管与取样阀连接，使气体通过导管进入0.85%的生理盐水中，将气体中的微生物溶于0.85%的生理盐水中，被洗涤后的空气通过排气口排出，时间是2分钟。在无菌室将洗涤水通过膜过滤的方法，使微生物附着于过滤膜上进行培养。直接置37℃恒温培养2天，进行菌落计数，即为2分钟气体含菌量。 　　2.3 套袖法 　　顾名思义形状与套袖相似，所不同的是一头宽一头窄，平铺呈梯形。在窄的一端穿上棉线控制其松紧，便于捆绑，它起到与外界环境隔离的作用。 　　实验步骤：在将取样口灭菌后，将其套住取样口，窄的一端向上，收紧棉线打结，然后再调节气体的流速，流速为培养基刚好不被气体吹起。置平皿于布袋中一只手（戴无菌手套）在里面拖住平皿旋转，另一只手在外面隔着布袋打开里面的平皿盖，时间是2分钟。直接置37℃恒温培养2天，进行菌落计数，即为2分钟气体含菌量。 　　3 结果与讨论 　　3.1 不同检测方法测结果的对比 　　3.1.1 以无菌空气为例（好氧菌） 　　控制相同的气体流速，取样时间相同（2分钟），用不同的方法对压缩空气进行微生物检测，同时用环境空气取样器（可以设定取样空气量）对环境空气进行微生物检测。结果如下表： 　　3.1.2 以发酵风包为例（好氧菌、厌氧菌） 　　3.2 讨论 　　3.2.1 通过比较上图中的实验结果，根据8次数据的对比不难看出，好氧菌和厌氧菌的每种检测数据的曲线形态基本吻合，三种方法的检测结果趋势完全吻合。平皿接触检测法的结果数值偏高，与周围环境的影响有一定的关系。水吸收检测法的数值偏低，是由于微生物没有完全被滞留在水中，结果都与检测方法的干扰有关。 　　3.2.2 由上表可见同一种压缩气体，取样方法不同，检测结果相差较大。 　　①平皿接触法简单易行，缺点是受环境影响因素较大，尤其是在细菌容易滋生的潮湿和温度较高的环境中，在吹气中，外界环境空气形成很强的气流，把环境空气中的微生同时也带入平板中,试验的数据会偏高，其中不乏周围环境所造成的危害，导致影响实验结果的真实性。 　　②水吸收法的前期准备工作比较繁多，对设备的要求高必须是特别制作的。取样时气体速度调节不稳定，不是气体中所有的微生物都会被滞留在水中，试验的数据有可能偏低，不能有效的反应出真实情况。后期需要回到实验室进行膜过滤培养，成本较高。