hbv基因与耐药检测 代理商版讲义教材.ppt

HBV分型和耐药突变基因检测 乙肝流行病学资料 HBV感染呈世界性流行，据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和HCC。 2006年全国乙型肝炎流行病学调查结果表明，我国1～59岁一般人群乙肝病毒表面抗原（HBsAg）携带率为7.18%，我国现有的慢性HBV感染者约9300万人，其中慢性乙型肝炎患者约2000万例。 乙肝临床诊疗现状 肝炎治疗的总体目标：最大限度地长期抑制HBV，减轻肝细胞炎性坏死及肝纤维化，延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，改善生活质量和延长存活时间。 慢性乙型肝炎治疗：主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎和抗氧化、抗纤维化和对症治疗，其中抗病毒治疗是关键，只要有适应证，且条件允许，就应进行规范的抗病毒治疗。 乙肝抗病毒药物 　干扰素（IFN-α） 我国已批准普通IFNα（2a、2b和1b）和聚乙二醇干扰素α（2a和2b）[PegIFNα（2a和2b）] 　核苷（酸）类药物　 我国已上市4种：拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比夫定 为何检测耐药？ EASL Clinical Practice Guidelines :Management of chronic hepatitis B virus infection. Journal of Hepatology 2012 vol.57|167-185 耐药！ 抗病毒不可承受之重！ 二、HBV分型与耐药突变基因检测产品简介 HBV分型和耐药突变基因检测试剂盒 注册号：国食药监械（准）字2011第3401177号 专利号：ZL200710073933.3 （PCR-反向点杂交法） 国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂 基因芯片(gene chip)：是多种特定的寡核苷酸序列为探针，固定于支持物表面上而成的二维DNA阵列。 基本原理：利用碱基互补配对原则，通过目的DNA与探针特异结合来判断目的DNA的序列信息。 基因芯片原理 本产品检测的样本为血清或血浆； 要求待检样本的HBV DNA载量≥1.0×103cpoies/mL。 样本要求 样本保存 为了避免DNA降解，制备好的血清或血浆，避免长时间室温放置； 2～8℃保存不超过48小时；-18℃以下保存不超过半年，避免反复冻融。 注意事项 试剂盒Ⅰ在-20 ℃试剂盒Ⅱ在2-8 ℃保存。 产品有效期为6个月， 在有效期内产品性能稳定。 试剂盒保存 仪器名称 参数及要求 台式高速离心机 转速≥13000rpm，转子规格：1.5mL 冰箱 双温区：4℃/-18℃；双门 移液器 1-10μL,10-100μL, 100-1000μL 干式恒温器 孔径：1.5 mL；控温范围：室温+5℃-100℃ PCR仪 0.2 mL，48或96孔 分子杂交仪 控温范围：环境温度+5℃-100℃，可调； 精度：0.1℃ 检测仪器 产品优势 国内唯一同时实现HBV分型与耐药突变基因检测的产品； 涵盖我国 4种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定、恩替卡韦）7个热点耐药位点16种突变： rtL180M、rtM204V/I、rtA181V/T、rtN236T、rtM250I/L/V、rtS202G/I、rtT184I/S/A/F/L； 设备要求低，容易在广大医院开展； 检测全程仅需6h，结果肉眼可直接读取。 全基因序列测定法 限制性片段长度多态性分析法（RFLP） 实时荧光 PCR法 亚能HBV 基因芯片 灵敏度 灵敏度低，最低检测限为20%； 灵敏，最低检测限为5%； 灵敏，最低检测限为5%； 灵敏，最低检测限为5%； 检测位点 所有突变位点 已知耐药位点 仅能检测rt204位点 我国4种核苷类药物7个耐药位点的16种突变 评价 1、测序试剂大多未获得SFDA批准； 2、操作繁琐、技术难度大、仪器要求高、不易在临床开展。 1、需针对每一个待测突变位点，分别设计特异性内切酶反应体系； 2、一些突变可能生成新的酶切位点，或破坏原有酶切位点，必须谨慎看待检测结果。 结果仅提示拉米夫定耐药。 1、是首个获得SFDA批准的，同时进行HBV分型、耐药检测的试剂盒； 2、准确性好、6小时出结果、结果肉眼可见。仪器要求低，操作便捷、易于临床使用。 HBV耐药检测产品比较 三、HBV分型与耐药突变基因检测 的意义与适应症 HBV基因型检测临床意义 HBeAg阳性患者中，B基因型对IFN-α治疗的应答率高于C基因 型，A基因型高于D基因型。 与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学 转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌； 预测干