桔梗皂苷rD诱导肺腺癌A549和A549／DDP细胞凋-辽宁中医药大学.PDFVIP

·１４８４· 　辽宁中医杂志２０１５年第４２卷第８期　 ＤＯＩ∶１０．１３１９２／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００１７１９．２０１５．０８．０４４ 桔梗皂苷－Ｄ诱导肺腺癌Ａ５４９和Ａ５４９／ＤＤＰ 细胞凋亡和周期阻滞 赵若琳，周坤福，张旭，陈美娟 （南京中医药大学 江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心，江苏 南京２１００２３） 摘　要：目的：探究桔梗皂苷－Ｄ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｉｎ－Ｄ，ＰＤ）诱导肺腺癌细胞（Ａ５４９）和Ａ５４９顺铂耐药细胞（Ａ５４９／ＤＤＰ）凋 亡和周期抑制的作用机制，为ＰＤ治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础。方法：采用ＭＴＴ法 检测细胞的增殖抑制率和耐药指数；流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用；Ｈｏｅｃｈｓｔ－３３２５８荧光染色观察细胞核形 态的变化；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果：ＭＴＴ检测结果显示，ＰＤ 对Ａ５４９和Ａ５４９／ＤＤＰ细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色发现，随着ＰＤ浓度增加，两种细 胞核形态都有明显的改变。进一步流式细胞术结果表明，ＰＤ诱导Ａ５４９和Ａ５４９／ＤＤＰ细胞凋亡和周期阻滞。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ ｂｌｏｔ检测结果表明，ＰＤ通过上调Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ－９、ｃｌｅａｖｅｄ－Ｃａｓｐａｓｅ－３和ＰＡＲＰ的表达，下调Ｂｃｌ－２和 Ｃａｓｐａｓｅ－３的表 达诱导Ａ５４９和Ａ５４９／ＤＤＰ细胞凋亡。此外，ＰＤ通过下调Ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１、Ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、Ｅ２Ｆ１和ｐ－Ｒｂ及上调 Ｐ１８的蛋白水平诱导Ａ５４９细胞周期 Ｇ０／Ｇ１阻滞。同时，ＰＤ通过下调Ｃｙｃｌｉｎ－Ｂ１、ｐ－Ｃｄｃ２、Ｅ２Ｆ１和ｐ－Ｒｂ及上调Ｐ２７ 的蛋白表达诱导Ａ５４９／ＤＤＰ细胞周期Ｇ２／Ｍ阻滞。结论：ＰＤ通过线粒体途径诱导Ａ５４９和Ａ５４９／ＤＤＰ细胞凋亡诱导，并 且引发Ａ５４９细胞Ｇ０／Ｇ１周期阻滞和Ａ５４９／ＤＤＰ细胞Ｇ２／Ｍ阻滞周期阻滞。 关键词：桔梗皂苷－Ｄ（ＰＤ）；非小细胞肺癌；凋亡；周期阻滞；Ａ５４９；Ａ５４９／ＤＤＰ 中图分类号：Ｒ７３４．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１０００１７１９（２０１５）０８１４８４０６ Ｐｌａｔｙｃｏｄｉｎ－ＤＩｎｄｕｃｉｎｇＣｅｌｌＣｙｃｌｅＡｒｒｅｓｔａｎｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＡ５４９ａｎｄＡ５４９／ＤＤＰＣｅｌｌｓ ＺＨＡＯＲｕｏｌｉｎ，ＺＨＯＵＫｕｎｆｕ，ＺＨＡＮＧＸｕ，ＣＨＥＮＭｅｉｊｕａｎ （ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２３，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＰｌａｔｙｃｏｄｉｎ－Ｄ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｉｎ－Ｄ，ＰＤ）－ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｉｎｌｕｎｇａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓ（Ａ５４９）ａｎｄＡ５４９ｃｉｓｐｌａｔｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓ（Ａ５４９／ＤＤＰ）ｆｏｒｐｒｏｖｉｄｉｎｇｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｂａ ｓｉｓｏｆｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒａｎｄｃｉｓｐｌａｔｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｂｙＰＤｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＭＴＴａｓｓａｙｗａｓ ｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｒａｔｅｏｆｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ．Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅ ａｒｒｅ