单胺氧化酶抑制剂苯乙肼对急性T淋巴细胞白血病的作用及其机制的研究-内科学、血液病专业论文.docx

万方数据 万方数据 目 录 缩略词表…………………………………………………………………………2 中文摘要…………………………………………………………………………3 英文摘要…………………………………………………………………………5 引言………………………………………………………………………………7 第一部分 单胺氧化酶抑制剂苯乙肼抑制 Molt-4 细胞增殖、诱导凋亡的研究 ……………………………………………………………………………………9 材料和方法 结果 讨论 第二部分 单胺氧化酶抑制剂苯乙肼对 Molt-4 细胞组蛋白 H3K4、H3K9 甲基化、 组蛋白 H3 乙酰化、DNA 甲基化的影响 ……………………………………………………………………………………19 材料和方法 结果 讨论 结论………………………………………………………………………………26 参考文献…………………………………………………………………………27 综述………………………………………………………………………………31 1 缩 略 词 表 HKMTs histone lysine methyltransferases 组蛋白赖氨酸甲基转移酶 MAO monoamine oxidase 单胺氧化酶 CDK CKI cyclin-dependent kinase cyclin-dependent kinase inhibitor 周期素依赖性激酶 周期素依赖性激酶抑制剂 MTT tetrazolium salts 四苯基氮唑蓝 DMSO HAT dimethyl sulfoxide histone acetyltransferase 二甲基亚砜 组蛋白乙酰转移酶 HDAC histone deacetylase 组蛋白去乙酰化酶 RPM revolutions per minute 每分钟转数 FAD flavin adeniine dinucleotide 黄素腺嘌呤二核苷酸 DNMT DNA methyltransferase DNA 甲基转移酶 2 单胺氧化酶抑制剂苯乙肼对急性 T 淋巴细胞白血病的作用及其 机制的研究 中文摘要 【目的】：研究单胺氧化酶抑制剂苯乙肼在体外对急性 T 淋巴细胞白血病 Molt-4 细胞增殖、凋亡及表观遗传学调控的影响，探讨其可能的作用机制。 【方法】：（1）应用 MTT 比色法检测经苯乙肼对 Molt-4 细胞增殖率的影响；流 式细胞术观察细胞凋亡的变化。（2）应用蛋白免疫印迹法（Western Blot）观察 苯乙肼作用后 Molt-4 细胞的凋亡相关蛋白 Caspase-3、Bcl-2、Bax 及细胞周期蛋 白依赖性激酶抑制蛋白 P21、抑癌蛋白 P15 表达水平的变化，组蛋白 H3K4、H3K9 甲基化及组蛋白 H3 乙酰化状态、DNA 甲基转移酶 DNMT1 的变化。 【结果】：（1)单胺氧化酶抑制剂苯乙肼抑制 Molt-4 细胞增殖，诱导 Molt-4 细胞 凋亡。苯乙肼 5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L 作用 24h 后，Molt-4 细胞增殖率分别为(87.68±3.54)%、(67.84±3.24)%、(51.48±3.37)%、(28.72± 2.56)%，p0.05；10μmol/L 苯乙肼作用 24h、48h、72h 后，细胞增殖率分别为 (67.84±3.24)%、(50.24±2.01)%、(40.31±2.25)%，随药物作用时间的延长增殖 率也逐渐下降，p0.05。苯乙肼 5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L 作用 24h 后， Molt-4 细胞的凋亡率分别为（13.64±2.58）%、（31.24±3.42）% 、（56.37±4.26）%， 呈浓度依赖性，p0.05。（2）苯乙肼可上调细胞凋亡相关蛋白 Bax、凋亡执行蛋 白 caspase-3、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白 P21 表达，下调抗凋亡蛋白 Bacl-2 表达；（3）苯乙肼上调 Molt-4 细胞组蛋白 H3K4me1、H3K4me2 甲基化水平及 H3 乙酰化水平，而组蛋白 H3K4me3、H3K9me1、H3K9me2 水平无明显改变； （4）苯乙肼处理 Molt-4 细胞后甲基化转移酶 DNMT1 表达下降，P15 蛋白表达 增加。 【结论】：（1）单胺氧化酶抑制苯乙肼能明显抑制 Molt-4 细胞的增殖，可能与 3 上调 P21 有关。（2）苯乙肼可诱导 Molt-4 细胞凋亡，可能与下调 Bcl-2 及上调 Bax 表达，启动效应蛋白 caspase-3 有关。（3）LSD1 抑制剂苯乙肼可提高与常 染色体有关的组蛋白 H3K4 单甲基及二