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低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验分析-骨外科学专业论文.docx

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低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验分析-骨外科学专业论文

苏州大学学位论文使用授权声明 本人先金了尊重 l曲式,关于农集、保碍,和使用学位诠 x.8!l组怠. 邸. 位论文著作权归属苏州文学.本学位论文电子文窑的内容 . m论文的内*将-.. J;,州火学有很向汩..书馆、同 P画社事咱就卖娥 息狼Jjz心、中因利字往*铺』单研究所〈舍万万撇电子IliFl?:). 中留学术:1111奇〈允盆.)电子虽it.iì能放究本. 显, it:玄的I件和电子 文事!!I. Jr;.常愉:Jt.垒.草帽倍饲.可以采用..:p、编印就其他1;创手段 保t汇筝ititt叉,旬以MM馀文的金或部分内*镰入有巢 .. a居舷法衍徨黛. ..论立口 本学位论文属 在._;4_?麟.后适用本组寇. 再带唱rit文d iêXf!;ft4!i. 年_B 细注主主 导.. I 马 ....a ..但坠主f I I 低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化 的诱导实验研究 中文摘要 第一部分 人退变髓核组织来源间充质干细胞的分离、培养及鉴定 【摘要】目的:体外分离、培养及鉴定人退变髓核组织来源的间充质干细胞 (NP-MSCs)并观察其生物学特性。方法:收集 10 例腰椎间盘退行性疾病患者的髓 核手术标本,采用 0.05%II 型胶原酶消化加贴壁法分离髓核间充质干细胞并体外培养 和扩增。用倒置相差显微镜观察人髓核间充质干细胞形态、流式细胞仪检测干细胞表 型分子、定向诱导人髓核间充质干细胞成脂、成骨及成软骨分化。结果:采用 0.05% II 型胶原酶 37℃消化 4 小时(h)即可从组织标本中分离出人髓核间充质干细胞。人 髓核间充质干细胞原代培养 3 天可见细胞贴壁,30 天左右达到 80%融合,传至第 3 代后,细胞形态转变成均一的长梭形或纺锤形,呈漩涡状排列。流式细胞仪检测人髓 核间充质干细胞高表达 CD29 和 CD105,不表达或低表达 CD34、CD45 及 HLA-DR。 多向诱导 21 天(d)后,成骨诱导组 Alizareen 染色和成软骨诱导组 Safranin’O 染色 呈阳性,成脂诱导组油红 O 染色阴性。结论:采用 0.05%II 型胶原酶消化结合贴壁法 可从人退变髓核组织中提取具有多向分化潜能的间充质干细胞。 【关键词】椎间盘;髓核干细胞;体外培养;诱导分化 第二部分 低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的生 物学诱导效应 【摘要】目的:探索低氧对人退变髓核组织来源的间充质干细胞(NP-MSCs) 向类髓核细胞定向分化的生物学效应。方法:在 5%氧浓度下,用含转化生长因子-β3 (TGF-β3)诱导培养基培养人髓核间充质干细胞,同时设立在 21%氧浓度下诱导培 养为对照组。诱导培养第 7 天(d)和 14d,实时荧光定量 PCR(Realtime-PCR)检 II II 。中文摘要 低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验研究 。 测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、SOX-9、Aggrecan 和 II 型胶原基因的表达,诱导培养 14d,采用免疫荧光法检测低氧诱导组与常氧诱导组细胞 II 型胶原的表达 组间比较 采用独立样本 t 检验。结果:NP-MSCs 诱导培养第 7d 时低氧组 HIF-1α 与 SOX-9 基 因的相对表达量高于常氧组,差异具有统计学意义(P0.05),但 Aggrecan 和 II 型胶 原基因相对表达量无显著性差异(P0.05)。在诱导培养 14d 时,低氧组 HIF-1α、SOX-9、 Aggrecan 和 II 型胶原基因相对表达量均高于常氧组,差异具有统计学意义(P0.05), 免疫荧光法检测两组细胞均合成 II 型胶原且低氧组荧光染色较对照组深。结论:人 髓核间充质干细胞可定向分化成类髓核细胞,低氧环境有利于该分化过程。 【关键词】椎间盘;髓核间充质干细胞;低氧;诱导分化 作 者:汪智文 指导老师:姜为民 教授 协助指导:李雪峰 讲师 PAGE PAGE III 低氧对人髓核组织来源间充质干细胞向类髓核细胞分化的诱导实验研究 英文摘要 The experimental research of effect of hypoxia on nucleus pulposus-like cells differention of human nucleus pulposus derived mesenchymal stem cells Abstract Chapter I In vitro Isolation,culture and identification of humannucleuspulposusde

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