地中海贫血基因未知突变检测-临床检验诊断学专业论文.docx

PAGE PAGE 10 地中海贫血基因未知突变检测 中文摘要 地中海贫血是珠蛋白基因突变导致珠蛋白肽链合成缺乏或合成量异常引起的溶 血性贫血疾病。是全球发病率最高的单基因遗传病之一[1]。其发病机制为珠蛋白基 因缺失或突变导致某种珠蛋白链合成速率降低，造成α/β链和非α/β链合成不均 衡而引起的溶血性贫血，但是血红蛋白结构不发生改变。血液学表现为小细胞低色 素性贫血。其有多种亚型，以α-地贫与β-地贫两种亚型最为多见。在我国南方尤 其是两广地区该疾病的携带率很高。其中，α-地贫在广东和广西两地区的携带率分 别高达 8.53%和 14.95%[2]。重症患者死亡率高，目前尚无有效的治疗方法。准确的 检测出地贫基因的携带者，做好产前诊断筛查具有重要的意义。但至今为止，临床 上只能对常见的点突变和缺失突变进行检测，而地贫突变如果不是常见的突变，可 能导致中重度患儿的出生。目前认为测序是点突变检测的金标准，但是操作步骤复 杂繁琐并且成本较高。因此我们需要寻找一种简单的、灵敏度高的检测突变的方法。 目前有大多研究通过先对待测基因进行点突变筛查，筛查出疑似的点突变序列后再 进行测序分析，从而减低成本以及减少工作量。最近有不少文献认为 HRM 检测方 法是一种新的很好的点突变检测方法，可以对未知的点突变起到筛查并减少工作量 的作用。对于地贫中的缺失突变，本文则采用实时荧光定量 PCR 方法来定量地贫缺 失基因拷贝数，来筛查未知的地贫缺失携带者。 关键词：地中海贫血，HRM 检测，实时荧光定量 PCR genetic diagnosis of the unknown abnormal gene of thalassemias Abstract Thalassemia is a group of genetic and hemolytic disease induced by disfunction of globin synthesis, which results from globin protein chain peptide synthesis partial or complete inhibition.α-thalassemia, β-thalassemia are the most common hereditary disease which happened mostly in south of China, the mortality of thalassemia is high and no good therapy can cure it. The best way to treat thalassemia is diagnosis of the mutant gene ,and which is significant to prenatal diagnosis. At present, only common known mutations and deletion mutations can be detected in clinical, and the point mutation would be miss. Sequencing The golden standard of point mutation is sequencing which is costing and troubled. Most researches are sequencing the doubted mutation gene which was detected by gene screening. A number of studies recommend the HRM which can be good used to screen the point mutation now. The RT-PCR method was used to detect the deletion mutation. Key words：thalassemia， HRM detection，qRT-PCR 第一部分 福州地区地中海贫血基因突变分析 摘要 目的：应用基因诊断技术对福建地区 481 名待测地贫病人进行地中海贫血基因 诊断，并对其进行血常规，血红蛋白电泳，铁代谢等血液学参数检测，综合分析其 基因型分布情况及血液学特征。 方法:：对 481 份血液样本分别检测其血液学参数及地贫突变基因。α-地贫缺失 突变采用多重 PCR 复合琼脂糖凝胶电泳方法检测东南亚型缺失( --SEA) 、右侧缺失 ( -a3.7) 和左侧缺失( -a4. 2) 这三种常见缺失型；α-地贫与 β-地贫常见点突变则采用聚 合酶链式反应( PCR) -膜反