肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对荚膜多糖的调控研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

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肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对荚膜多糖的调控研究-临床检验诊断学专业论文

万方数据 万方数据 4.讨论 19 第二部分 肺炎链球菌 CcpA 蛋白对 CPS 的调控作用研究 21 1.实验材料 21 1.1 菌株和质粒 21 1.2 实验试剂 22 1.3 主要仪器 24 2.实验方法 24 ccpA 缺失株 D39△ccpA 的构建与鉴定 24 ccpA 回复株(D39ΔccpA::ccpA)的构建与鉴定 26 2.3 荚膜多糖含量检测 26 2.4 实时荧光定量 PCR 27 2.5 统计方法 27 3.实验结果 27 ccpA 缺失株(D39△ccpA)的构建与鉴定 27 成功构建 ccpA 回复株(D39ΔccpA::ccpA) 35 3.3ccpA 基因缺失或回复表达后,细菌 CPS 含量的变化 35 4.讨论 37 全文总结 39 参考文献 40 文献综述 43 肺炎链球菌荚膜多糖的研究现状及 CcpA 对细菌的调控研究 43 致谢 51 攻读硕士学位期间发表的学术论文题录 52 重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 英汉缩略语名词对照 英文缩写 AP 英文全称 Ammonium persulfate 中文全称 过硫酸铵 bp base pair 碱基对 BSA Bovine Serum Albumin 牛血清白蛋白 CPS Capsular polycchareds 荚膜多糖 CSP Competence-stimulating peptide 感受态刺激因子 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP Deoxyribonucleosidetriphosphate 脱氧核糖三磷酸 ddH2O Double distilled water 双蒸水 DOC Deoxycholate sodium 脱氧胆汁酸盐 ELISA Enzyme-linked immunoadsorbent assay 酶联免疫吸附试验 EMSA electrophoretic mobility shift assays 电泳迁移率试验 ELC chemolyminescence 增强化学发光法 GFP Green Fluorescent Protein 绿色荧光蛋白 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 IPTG Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside 异 丙 基 硫 代 半 乳 糖 苷 kDa Kilodalton 千道尔顿 LB Luria-Bertani medium LB 培养基 min minute(s) 分钟 ml Ni2+-NTA milliliter nickel-nitrilotriacetic acid 毫升 镍-次氮基三乙酸 OD Optical Density 光密度 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 1 RNA rpm ribonucleic acid revolutions per minute 核糖核酸 转/分 rTaq s Thermos aquaticus (DNA polymerase) second(s) 耐热 DNA 聚合酶 秒 S. pneumoniae Streptococcus pneumoniae 肺炎链球菌 SDS sodium dodecylsulfate 十二烷基硫酸钠 TBE Tris boracic acid buffer Tris 硼酸电泳缓冲液 TMB 3,3,5,5-Tetramethylbenzidine 3,3,5,5- 四甲基 联苯胺 TEMED N,N,N’,N’-Tetramethylethylenediamine N,N,N’,N’-四甲基乙 二胺 μl microliter 微升 2 肺炎链球菌糖代谢蛋白 CcpA 对荚膜多糖的调控研究 摘要 目的 肺炎链球菌荚膜(Capsule CPS)是肺炎链球菌的一种重要的毒 力因子,在细菌定植、粘附中发挥重要作用,可保护细菌免受宿主的 吞噬杀伤作用。肺炎链球菌荚膜合成基因为一操纵子结构,即 cps 基因 座,其表达水平受其上游启动子的调控,但目前尚不清楚有哪些蛋白 可通过该启动子调控这些基因及 CPS 的合成。 我们前期研究通过 DNA pulldown 实验筛选到 CcpA 可能与肺炎链 球菌荚膜多糖(CPS)基因座启动子区域结合,且 CcpA(catabolite control protein A, CcpA)是

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