肝胆胰恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群的变化及其临床意义-外科学(普外)专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2012 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 肝胆胰恶性肿瘤患者外周血 T 细胞亚群的变化及其临床意义 专业：普通外科学 研究生：华付 导师：孙诚谊教授 杨大刚副教授 摘要 目的 了解肝胆胰恶性肿瘤患者治疗前细胞免疫功能状况，探讨T细胞亚群 绝对数值与肿瘤的相关性。方法 应用流式细胞术检测肝胆胰恶性肿瘤患者外周 血CD3+，CD4+ ，CD8+绝对计数及 CD4+／CD8+比值 ，并与非肿瘤患者为对照组 进行对比研究。结果 肝胆胰恶性肿瘤病人肿瘤患者存在免疫改变和紊乱，外周 血T淋巴细胞亚群表现CD3+，CD4+绝对计数降低，CD8+绝对计数升高，CD4+／CD8+ 比值降低，与非肿瘤组比较差异均显著(p0.05)。结论 肝胆胰恶性肿瘤患者存 在细胞免疫功能低下，监测肿瘤患者T细胞亚群水平，对评估患者的细胞免疫功 能及为临床进一步对恶性肿瘤治疗效果的评价提供临床参考数据。 关键词：肝胆胰恶性肿瘤；T 淋巴细胞亚群 略缩词表 CD3+:代表全 T HYPERLINK /z/Search.e?sp=S%E7%BB%86%E8%83%9Eamp;ch=w.search.yjjlinkamp;cid=w.search.yjjlink 淋巴细胞，它包括 T 辅助/诱导 T 细胞(CD4+)和 T 抑制/ HYPERLINK /z/Search.e?sp=S%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%AF%92amp;ch=w.search.yjjlinkamp;cid=w.search.yjjlink 细胞毒 T 细胞(CD8+) CD4+:代表 T 辅助/ HYPERLINK /z/Search.e?sp=S%E4%BA%9A%E7%BE%A4amp;ch=w.search.yjjlinkamp;cid=w.search.yjjlink 诱导细胞亚群 CD8+:代表 T 抑制/ HYPERLINK /z/Search.e?sp=S%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%AF%92%E6%80%A7amp;ch=w.search.yjjlinkamp;cid=w.search.yjjlink 细胞毒性细胞亚群 CD4+／CD8+:代表 T 辅助细胞/T 抑制细胞的比值 FCM: 流式细胞仪 PBS:磷酸盐缓冲液 1.前 言 机体的免疫状况与恶性肿瘤的发生和发展有着密切的联系。当宿主的免疫功 能低下或受到抑制时，肿瘤发生率高；且肿瘤一旦发生又可通过其产生的免疫抑 制因子进一步抑制机体的防御机能。在抗肿瘤免疫中，细胞免疫尤其是T淋巴细 胞的作用更为重要。T淋巴细胞参与机体的抗肿瘤免疫应答，其亚群的数量是反 映机体免疫功能的重要指标。本文运用流式细胞仪检测肝胆胰恶性肿瘤患者外周 血T细胞亚群细胞数量，以了解患者免疫功能的情况。 2.材料与方法 2.1 临床资料 2.1.1 研究对象 所选对象均为2011年4月至2011年10月在我科住院的患者。肿瘤 组31例，男17例，女14例，年龄34-74岁，平均(59.6±11.3)。其中肝癌8例、胆 管癌9例、胆囊癌2例、壶腹周围癌5例、胰头癌7例，病理诊断10例，临床诊断21 例。所有病例入院前均未应用化疗、放疗和其他对免疫功能有影响的药物。非肿 瘤组为35例，男20例，女15例，年龄25-78岁，平均(53.1±15.9)。其中胆囊结 石25例，胆囊息肉1例，胆总管结石6例，胆总管下端狭窄1例，脾血管瘤1例，肝 血管瘤1例，术前均排除肿瘤相关疾病及对免疫功能有影响的药物使用史。 2.1.2 仪器与试剂 使用 BD 公司 FACSCanto 流式细胞仪(美国 BD 公司)；绝对计 数管（BD Trucount Tubes）；BDTritest CD3/4/8 抗人荧光试剂；溶血素（BD SimultestIMK-Lymphocyte Lysing Soloution） 2.1.3 方法 研究对象入院后抽取空腹肘静脉血2ml于EDTA-K2（乙二胺四乙酸二 钾）抗凝管中，向True Count管中分别加入20μl抗体和50μl的抗凝全血，混匀后 于室温暗处孵育15min，加入FACS(1×)溶血素2ml，充分混匀于室温暗处孵育 10min；1000r/min离心5min,弃上清,加入2mlPBS洗1次,l000r／min离心,弃上清， 加0.5mlPBS充分混匀，24h内上流式细胞仪进行分析。应用CaliBRITE标准微球、 FACSCanto软件调节PMT电压、荧光补偿及灵敏度，应用FACSDiva分析软件对处理 好的标本进行CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞绝对计数。 2.1.4 统计学分析 应用 SPSS 17.0 统计软件，数据以 ??