肺炎链球菌非经典分泌蛋白GAPDH的分泌机制及其与热休克蛋白DnaJ的相互作用研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 HYPERLINK \l _bookmark0 发表论文/参加的学术会议 56 重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 英汉缩略语名词对照 英文缩写 ATCC 英文名称 American type culture collection 中文名称 美国模式菌种收集中 心 aa Amino acid 氨基酸 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 bp Base pair 碱基对 Cam Chloramphenicol 氯霉素 CSP-1 Competence stimulating peptide 1 感受态刺激因子 1 ddH2O Double distilled water 双蒸水 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 E Glutamic acid 谷氨酸 ECL Chemoluminescence 化学发光 E.coli Escherichia coli 大肠杆菌 Eno Enolase 烯醇化酶 ELISA Enzyme-linked immunoadsorbent assay 酶联免疫吸附试验 F Phenylalanine 苯丙氨酸 GAPDH Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase 三磷酸甘油醛脱氢酶 GFP Green fluroescent protein 绿色荧光蛋白 G Glycine 甘氨酸 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 H Hour 小时 IPTG Isopropylthio-β-D galactoside 异丙基硫代-β-D-半乳 糖苷 I Isoleucine 异亮氨酸 Kana kanamycin 卡那霉素 K Lysine 赖氨酸 KDa Kilodaolton 千道尔顿 L Leucine 亮氨酸 LB Lria–Bertain medium LB 培养基 M Mole 摩尔 Min Minute 分钟 Ni2＋-NTA Nickel-nitrilotriacetic acid 镍-次氮基三乙酸 1 NCTC National Collection of Type Culture 国家典藏菌种保存中 心 N Aspartic acid 天冬氨酸 OD Optical density 光密度 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 PLY Pneumolysin 肺炎链球菌溶血素 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 Rpm/min Revolutions per minute 转/分 Q Glutamine 谷氨酰胺 R Arginine 精氨酸 Strep Streptomycin 链霉素 S Serine 丝氨酸 T Threoine 苏氨酸 Tris Tris(Hydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 TMB Tetramethyl benzidine 四甲基联苯胺 SDS Sodium dodecylsulfate 十二烷基硫酸钠 3-AT 3-amino-1,2,4-triazole 3-氨-1,2,4-三唑 Tet Tetracycline 四环素 μg Microgramme 微克 μl Microliter 微升 V Valine 缬氨酸 WHO World Health Organization 世界卫生组织 Y Tyrosine 酪氨酸 2 肺炎链球菌非经典分泌蛋白 GAPDH 的分泌机制及其 与热休克蛋白 DnaJ 的相互作用研究 摘 要 目的 明确肺炎链球菌非经典分泌蛋白 GAPDH 的分泌是否由细菌 裂解引起，并确定 GAPDH 分泌必需结构域。同时，验证该蛋白与热 休克蛋白的 DnaJ 的相互作用，为深入研究 GAPDH 的分泌机制奠定基 础。 方法 原核表达 GAPDH 重组蛋白并制备其多克隆抗体，利用该多 克隆抗体通过 Western Blot 评价 GAPDH 在肺炎链球菌中的保守性。 缺失肺炎链球菌主要自溶酶 LytA 使其丧失自溶能力，通过 Western Blot 比较野生菌和 LytA 缺陷菌 GAPDH 的分泌是否存在差异。同时 以只在细胞内表达的 CodY 蛋白为参照，鉴定肺炎链球菌对数生长早 期 GAPDH 的分泌是否伴有细菌裂解。利用 Jpred3 软件分析 GAPDH 二级结构和功能结构域，利用 Swiss-Model 软件对 GAPDH 进行同源 模建，根据生物信息学结果进行截短