低分子肝素拮抗肝素酶在子痫前期肾小球内皮细胞损伤中的作用-妇产科学专业论文.docx

华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 低分子肝素拮抗肝素酶在子痫前期肾小球内皮细胞损伤中的作用 学位申请人：李宇琪 指导教师：乔福元 教授 中文摘要 第一部分 子痫前期患者肾脏损伤的临床研究 目的：探讨子痫前期肾脏损伤的严重程度与患者病情及妊娠结局的关系。 方法：回顾性分析 2009 年 1 月~2011 年 12 月在华中科技大学同济医学院附属同 济医院妇产科就诊的 153 例子痫前期患者的临床资料。根据尿蛋白检测结果(+)、(2+)、 (3+)将子痫前期患者分为 A、B、C 三组，每组分别为 57、35 及 61 例。对各组患者血 压、血浆白蛋白含量、肾功能及与围产儿结局相关的各项指标进行统计分析。 结果：C 组患者肾功能指标血清尿素、肌酐及尿酸含量较其他 2 组明显上升，且 3 组中患者尿蛋白含量越多，血清尿素、肌酐及尿酸值越高；血压、超声 S/D 值亦明 显升高；而血浆白蛋白含量明显降低，分娩孕周提前，胎盘重量及新生儿体重较轻 (p0.05)。C 组新生儿死亡率显著上升，羊水污染严重。 结论：子痫前期患者尿蛋白含量的多少与肾脏功能的损伤程度、患者病情及围产 儿结局密切相关，尿蛋白的含量能反映子痫前期的严重程度。 关键词：子痫前期；尿蛋白；肾功能；妊娠结局 第二部分 正常妊娠与子痫前期血清对人肾小球内皮细胞损伤的影响 目的：研究子痫前期血清对人肾小球内皮细胞的损伤作用，探讨子痫前期蛋白尿 的形成及肾脏损伤的机制。 方法：收集正常妊娠与子痫前期孕妇血清标本各 12 例，分别将其加入人肾小球 内皮细胞培养基中进行干预，同时利用胎牛血清作为对照。1.利用 transwell 小室及荧 光标记的牛血清白蛋白检测单层人肾小球内皮细胞的屏障功能；2. 利用荧光定量 PCR 方法检测人肾小球内皮细胞 ET-1 的表达；3.利用 CCK8 试剂盒检测人肾小球内皮细胞 的增殖能力；4.利用凋亡检测试剂盒检测人肾小球内皮细胞的凋亡情况。将 结果：与胎牛血清组比较，1.子痫前期血清组中通过单层人肾小球内皮细胞的牛 血清白蛋白浓度明显升高；2.子痫前期血清组人肾小球内皮细胞 ET-1mRNA 表达显著 升高。3.正常妊娠血清组人肾小球内皮细胞的各项指标无显著差异。3 组人肾小球内 皮细胞的增殖与凋亡率无显著差异。 结论：子痫前期血清可以破坏肾小球内皮细胞的屏障功能，导致其通透性增加， 可能为子痫前期蛋白尿的形成机制之一。 关键词：子痫前期；人肾小球内皮细胞；通透性；蛋白尿 第三部分 低分子肝素拮抗外源性肝素酶Ⅲ对人肾小球内皮细胞 损伤的作用 目的：1.研究低分子肝素对经子痫前期血清干预的人肾小球内皮细胞损伤的保护 作用； 2.探讨低分子肝素拮抗外源性肝素酶Ⅲ对人肾小球内皮细胞通透性损伤的作用。 方法：1.在子痫前期血清干预的人肾小球内皮细胞培养基中加入低分子肝素，利 用 transwell 小室及荧光标记的牛血清白蛋白、荧光定量 PCR 方法比较低分子肝素干 预前后人肾小球内皮细胞的损伤情况。 2.在人肾小球内皮细胞培养基上清中分别加入胎牛血清、外源性肝素酶Ⅲ和同时 给予外源性肝素酶Ⅲ以及低分子肝素，利用 transwell 小室及荧光标记的牛血清白蛋白 检测单层人肾小球内皮细胞的屏障功能。比较不同组间人肾小球内皮细胞通透性的差 异。 结果：1.与子痫前期血清组相比，加入低分子肝素后通过单层人肾小球内皮细胞 的牛血清白蛋白浓度明显降低；人肾小球内皮 ET-1mRNA 的表达明显下降；增殖与 凋亡能力无明显改变。 2.给予外源性肝素酶Ⅲ后通过单层人肾小球内皮细胞的牛血清白蛋白浓度显著升 高，而同时给予外源性肝素酶Ⅲ和低分子肝素后通过单层人肾小球内皮细胞的牛血清 白蛋白浓度与胎牛血清组相比无明显差异。 结论：低分子肝素能够改善子痫前期血清对人肾小球内皮细胞的损伤，并拮抗外 源性肝素酶Ⅲ对人肾小球内皮细胞通透性的破坏。低分子肝素可能通过拮抗肝素酶， 保护肾小球内皮细胞的屏障功能，从而减少子痫前期蛋白尿的形成。 关键词：低分子肝素；肝素酶；子痫前期；蛋白尿 The effect of low molecular weight heparin on glomerular endothelium injury of pre-eclampsia trough antagonizing heparanase Abstract Part Ⅰ A clinical research about the kidney injury of preeclampsia Objective: To explore the relationship between the severity of kid