福建省红树林稀有放线菌的多样性及筛选-微生物与生化药学专业论文.docxVIP

福建医科大学硕士学位论文 福建医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 10 目 录 中文摘要2 英文摘要3 第一章 福建省红树林放线菌概述5 放线菌概述5 极端微生物5 福建省红树林概况5 红树林放线菌资源发掘现状6 第二章 福建省红树林放线菌的多样性分析8 引言8 材料8 方法15 结果19 第三章 红树林放线菌次级代谢产物卤代酶和 NRPS 基因筛选 36 引言36 材料36 方法38 结果41 结论与讨论43 参考文献45 致谢48 综述 红树林稀有放线菌多样性以及次级代谢产物研究进展49 福建省红树林稀有放线菌的多样性及筛选 Diversity and Screening of Actinomycetes Isolated from the Mangroves of Fujian Province 中 文 摘 要 目的：为了探究福建省红树林稀有放线菌的多样性，以便能够筛选获得新药源活 性次级代谢产物产生菌,为后续资源开发奠定基础。方法：使用 14 种选择性培养 基，对采自于福建省红树植物根际的 26 份土样 ，进行放线菌菌株选择性分离及 鉴定；利用纯培养方法对分离菌株进行纯化培养，光学显微镜切片观察法结合扫 描电子显微镜，对分离菌株根据表观形态特征进行初步鉴定；利用小单孢菌特异 性引物 M558F 和 C1028R，对初筛得到的代表菌株进行 PCR 扩增，排除扩增反应 阳性菌株；利用细菌通用引物 27f 和 1492r，对代表菌株基因组 DNA 进行 16S rRNA 基因序列 PCR 扩增，对得到的 136 个菌株的 16S rRNA 序列进行系统进化分析； 利用功能基因特异性引物 PCR 扩增法，选取代表菌株进行卤化酶基因和非核糖体 多肽合成酶（ＮＲＰＳ）基因的检测。结果：从福建省红树林 26 份土样中共分 离到 803 株放线菌，对其中 136 株放线菌进行 16S rRNA 基因序列分析鉴定的结 果显示，它们分布于放线菌纲下的 7 个科，13 个属。对这 136 株放线菌进行 NRPS 和卤化酶基因检测的结果显示，阳性检出率分别为 40.4%和 13.2 %。结论：福建 红树林放线菌具丰富多样性，其优势菌群以小单孢菌为主，并含有多个稀有放线 菌种群，部分菌株具有产生非核糖体多肽合成酶和卤化酶的能力。 关键词： 红树林，放线菌, 多样性，非核糖体多肽合成酶，卤化酶 Diversity and Screening of Actinomycetes Isolated from the Mangroves of Fujian Province Abstract Objective: In order to explore rare actinomycetes diversity from the mangroves in of Fujian province and to isolate new actinomycetes for discovering compounds of pharmaceutical importance.To lay the foundation for future resource development.Methods:We collected 26 soil samples from Fujian Mangrove rhizosphere and 14 kinds of selective media were used to isolate actinomycetes. The isolates were identified by morphology and 16S rRNA gene sequence analysis．We use pure culture method to screen type strain.After the production of actinomycetes microsections,we use optical microscopy (OM) and scanning electron microscopy (SEM) to observe their apparent morphological characteristics.After the work that actinomycetes selected were preliminary identified is completed,we filter and discard a lot micromonospora by useing specific primer M558F and C1028R. The PCR reaction is completed by