正常生理和1型糖尿病病理下的慢性生长激素刺激对肝脏胰岛素信号的影响分析.docVIP

正常生理和1型糖尿病病理下的慢性生长激素刺激对肝脏胰岛素信号的影响分析 DOI： 10.16658/j.cnki.l 672-4062.2016.13.123 ［ ］目的探讨慢性生长激素在1型糖尿病病 理与正常生理下对肝脏胰岛素信号的影响。方法对健 康小鼠注射慢性生长激素，对1型糖尿病小鼠以链脲 佐菌素诱导，并进行Akt和PTEN的检测。结果对 健康小鼠注射慢性生长激素后肝内胰岛素信号通路分 子Akt磷酸化能够被抑制，同时会显著增加该信号通 途的负调控分子PTEN表达(P0.05);除此之外对胰 岛素信号的p85调节亚基进行检测，在慢性生长激素 刺激下两种小鼠的表达水平无变化(P0.05)。结论将 慢性生长激素长期使用可以对肝脏胰岛素信号进行抑 制，机制主要与PTEN表达升高有关，然而机制在病 理状态下不同。 ［关键词］正常生理；1型糖尿病；慢性生长激素; 肝脏胰岛素信号 ［ ］R587.1 ［ ］A ［ ］ 1672-4062 (2016) 07 (a) -0123-02 生长激素是一种肽类激素，由腺垂体嗜酸性细胞 分泌，主要受昼夜节律、性别、年龄、生长激素释放 激素的调节和影响，它的功能主要为代谢调节和促进 生长发育，作用的脏器主要包括了肾脏、肺、肝脏、 肌肉和心脏等，而对肝脏的影响作用尤为显著。目前 慢性生长激素的应用具有广泛性，但是在长期使用的 情况下就会将各种副作用引发，如胰岛素抵抗或者是 肿瘤等，目前对于相关机制还在进一步研宄中，现报 道如下。 1资料与方法 1.1 一般资料 选择30只Balb/c小鼠和50只C57BL/6小鼠， 所有小鼠均为雄性，且周龄在6?8周，均符合SPF 级饲养标准。 1.2方法 1.2.1给药与分组以30只Balb/c小鼠为调查对 象，将其随机分为两组，每组15只，一组注射无菌生 理盐水（对照组1组），另一组注射慢性生长激素（观 察组），且两组注射的体积相等，均是经腹腔注入，注 入时间为下午3: 00?5: 00，持续性注射3周。 1.2.2构建T1DM小鼠模型随机将50只C57BL/6 小鼠分为STZ组和对照2组，各组分别为30只和20 只，对照2组注射120 g/kg的拧檬酸钠，而STZ组则 注入STZ，同样是经腹腔，且注射3d，之后进行小鼠 体质量和空腹血糖的测定，当空腹血糖在11.1 mmol/L 及以上的情况下则视为T1DM造模成功。之后再对造 模成功的T1DM小鼠进行分组，即糖尿病GH组和模 型组，每组15只，前者每天下午3: 00?5: 00注射 1 ug/grhGH，而后者则将无菌生理盐水注射，且体 积相等，持续性注射3周。 1.2.3采集与处理标本在采用慢性生长激素刺激 3周后，于前1 d晚上11点对小鼠禁食，但可以饮水， 并于当天凌晨5: 30将其处死，首先对小鼠空腹体质 量进行测定，并于处死前10 min将2 IU/kg生理盐水 或等量重组人胰岛素经腹腔注射，同时将戊巴比妥钠 于处死前注射，在完全麻醉的情况下对小鼠进行取肝 和处死。 1.2.4 Western blotting蛋白印迹分析对各组小鼠 的肝脏组织进行提取，约为绿豆大小，之后进行研磨， 将蛋白提取做Western blotting检测p85、PTEN表达 水平与Akt磷酸化水平。将肝组织蛋白提取，以8% 聚丙烯酞胺SDS恒压电泳，100 mA恒定电流 进行150 min转膜；之后在进行半小时的5%脱脂奶室 温封闭，在杂交袋中置入PVDF膜，并在4°C的环境 中孵育4?6 h或者是温室条件下孵育一抗1?2 h，将 二抗以1 : 3 000?1 : 5 000的比例进行稀释，室温下 孵育二抗与PVDF膜30min;清洗15 min PBS-T，持 续3?6次，直至显影、发光。扫描胶片，对各组目标 条带的灰度值以目的条带的分子量为依据进行Image J软件分析，内参为GAPDH或爲-actin,参照为总 Akt,对目的蛋白的相对表达量以相应蛋白条带与 Akt、GAPDH、0-actin的比值进行计算。 1.3统计方法 对调查的数据资料借助统计学软件SPSS 16.0进 行处理分析，以标准差（x士s）表示数据，以t检验 两组间比较，当P0.05）;同时模型组与观察组相比， 在慢性生长激素刺激之后T1DM小鼠的p85表达水平 改变同样不明显，差异无统计学意义（P0.05）o 2.3胰岛素信号p-Akt 对标志蛋白Akt的活性水平进行检测得出健康小 鼠比对照1组在采用慢性生长激素刺激之后Akt磷酸 化水平下降显著，差异具有统计学意义（P0.05）。 3结论 经以上的调查显示，将慢性生长激素长期使用1 型糖尿病小鼠和健康小鼠均会产生胰岛素抵抗。在细 胞水平上，无论内源胰岛素刺激是否存在，胰岛素模 拟内源性胰岛素分泌