雷公藤多苷片对缬沙坦在大鼠体内药代动力学影响.docVIP

雷公藤多苷片对缬沙坦在大鼠体内药代动力学影响 　　[摘要] 目的 研究大鼠合用雷公藤多苷片和缬沙坦后，雷公藤多苷片对缬沙坦药代动力学的影响。 方法 16只雄性SD大鼠，随机分为单独给药组和联合给药组两组，其中单独给药组灌胃缬沙坦（20 mg/kg），联合给药组灌胃雷公藤多苷片（10 mg/kg）和缬沙坦（20 mg/kg）。不同时间点取血并采用LC-MS测定缬沙坦的血药浓度，计算药代动力学参数。 结果 与单独给药组相比，联合给药组缬沙坦的最大血药浓度[（1.57±0.32） vs （1.01±0.28）μg/mL]和血浆曲线下面积[（10.01±0.58） vs （6.82±0.77）mg?h/L]明显增加（P98%）和厄贝沙坦（纯度98%）（中国药品生物制品检定所）。雷公藤多苷片（上海复旦复华药业有限公司，10 mg，国药准字。 　　1.2 缬沙坦血浆浓度测定 　　色谱柱：Waters Xbridge C18色谱柱（3.0×100 mm，3.5 μm，USA）。进样量：5 μL，流动相：水（含0.1%的HCOOH）：甲醇（60：40，v：v），流速：0.6 mL/min。 　　采用SIM（Positive）模式进行离子监测。其中缬沙坦：m/z 436.1，厄贝沙坦：m/z 429.2。碎片电压：110 V，干燥器流速：11.0 L/min，雾化器压力：40 psi，干燥器温度：350°C，毛细管电压：3500 V。 　　1.3血浆样品前处理方法 　　向100 μL血浆样品中加入20 μL甲醇和180 μL含有内标厄贝沙坦（100 ng/mL）的乙腈溶液，涡旋30 s，12000 rpm离心10 min，取上清液进样分析。 　　1.4标准曲线制备 　　精密称量缬沙坦置于容量瓶中，加入适量的乙腈制成浓度为2 mg/mL的样品溶液。精密称取一定量的内标厄贝沙坦于容量瓶中，加入适量的乙腈配制浓度为200 ng/mL内标溶液。采用乙腈将缬沙坦稀释成（50～10000）ng/mL浓度梯度的溶液，然后取20 μL加入到含有100 μL空白甲醇的EP管中，加入180 μL内标溶液，涡旋30 s，12000 rpm离心10 min，取上清进样分析。按上述方法配制质控样品溶液，其中缬沙坦为20、200、1600 ng/mL。样品于-4°C保存备用。 　　1.5方法学考察 　　1.5.1 选择性 将含有缬沙坦的待分析血浆样本与来源于不同大鼠的6批血浆样本的色谱图进行比对，以观察血浆样本中是否有其他成分存在干扰缬沙坦的检测。 　　1.5.2 标准曲线及最低检测限 采用缬沙坦的峰面积与厄贝沙坦峰面积之比对应浓度作图，计算线性回归方程（最小二乘法）。将缬沙坦的信噪比为10定为最低定量限（准确度和精密度≤20%）。 　　1.5.3 准确度和精密度 日内精密度和准确度采用24 h内连续五次进样的样品进行计算；日间精密度和准确度采用在连续3 d内进样质控样品进行计算。 　　1.5.4 提取回收率和基质效应 提取回收率通过比较加缬沙坦血浆经过前处理之后所得的峰面积与前处理之后血浆加缬沙坦测定的峰面积的比值来计算；基质效应通过比较前处理之后血浆加缬沙坦测定的峰面积与同浓度的乙腈样品溶液的峰面积比值来计算。 　　1.5.5 稳定性 稳定性进行如下考察：短期稳定性（室温放置4 h）、进样器稳定性（进样器放置24 h）、三次冻融循环（-40°C冻存，室温下融化）及长期稳定性（-40°C冻存15 d）。 　　1.6动物实验 　　雄性SD大鼠16只，体重（250±20） g，由浙江中医药大学实验动物中心提供[合格证号：SCXK（沪）2012-000]。大鼠自由摄食饮水，适应性饲养1周[25℃、（60±5）%湿度]。实验前禁食。实验前将大鼠随机分为单独给药组和联合给药组两组，每组8只，其中单独给药组灌胃缬沙坦20 mg/kg；联合给药组灌胃雷公藤多苷片（10 mg/kg）和缬沙坦（20 mg/kg）。 　　于不同时间点（0.083、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、24 h）眼眶取血（250 μL）置于涂有肝素的EP管中，离心（3500 rpm、5 min）取上清，-40°C保存。 　　1.7 统计学方法 　　采用Das 3.0软件计算药代动力学参数。采用t检验进行分析，P 　　上述验结果表明，同时服用两药后，雷公藤多苷片会对缬沙坦药代动力学行为产生明显的影响，主要表现在抑制缬沙坦的体内代谢，从而增加其血药浓度，增加其系统暴露。缬沙坦为肝脏代谢酶CYP3A4的代谢底物[10]，而雷公藤多苷片中的主要活性成分雷公藤甲素和雷公藤红素会抑制CYP3A4的活性[11-12]。因此，共同服用雷公藤多苷片和缬