犬颈动脉再狭窄相关信号表达的分析.pdf

犬颈动脉再狭窄相关信号表达魄型堕 材料与方}上 材料与方法 一、 材料 1．实验动物 成年健康杂种犬12条，雌雄不拘，体重15～17公斤，由苏州大学医学院实 验动物中心提供。 2．常规手术器械 手术刀片，5毫升、10毫升注射器、Medtronic压力注射器。 3．穿插针及导管系统 Flex 6mmX4cm球囊导管。 超滑导丝，美国Cordis公司的Power 4．造影剂与药品 欧乃派克：上海乃科明公司提供，线利多卡因，肝素，3％戊巴比妥钠：苏州大 学医学院外科总论实验室提供。 5．仪器与设备 plus数字减影血管造影机，Coulter公司流式细胞仪 德国西门子Angiostar (激发波长488nm，发射波长522nm)，Anthos2010酶标仪。 6．试剂 美国MARKETINC公司血小板衍生生长因子(PDGF)ELASA试剂盒(Dog． G I T 公司Ig 1重链F altrasensitive 牛血清的PBS液(pH7．4)、0．5％多聚甲醛、红细胞裂解液由杭州联科公司提供。 犬颈动脉再狭窄相关信号表达的研究———— 塑料‘!乏瞄 二、 方法 1．取犬12条，麻醉后经股动脉引入4F猪人头导管选择至主动脉弓，行DSA 造影检查，观察各主要分支走行。先后行选择性左、右颈总动脉DSA造影检查，测 量管径。将4F猎人头导管置于一侧颈总动脉中段，引入交换导丝，经交换导丝引入 6ram×4cm球囊导管至颈总动脉中段，扩张球囊，维持在14个大气压左右，持续一 分钟，抽瘪球囊，间歇一分钟，再次充盈球囊，持续加压一分钟，立即拍片记录， 然后抽瘪球囊。退出球囊导管，再引入造影导管至扩张侧颈总动脉近端行血管造影。 术毕送回苏州大学医学院实验动物中心饲养。 2．每条犬分别于术前、术后2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48 小时、72小时留取静脉血，离心获取血浆，送苏州大学医学院血液研究室检测血小 苏州大学医学院免疫研究室检测淋巴功能相关抗原一l(LFA-1)、巨噬细胞分子 一1(M^C一1)，根据检测指标数据绘制动态曲线，各组问进行统计学分析和比较。 3．按照球囊血管成形术后2周、4周、6周、8周、lO周，将所有犬分为5组， 每组2条犬行目标血管造影检查，采用西门子Angiostarplus血管造影机自带测量 软件测量血管狭窄率，观察血管狭窄程度。血管造影检查后处死实验动物，获取正 常血管及目标血管，以lmm厚度连续取材。所取组织经脱水、透明、石蜡包埋后， 行常规HE染色观察血管狭窄情况，并进行组织化学染色及免疫组织化学染色，检测 观察VSMC增殖情况，并分别于2、4、6、8、10周每组血管断面切片选取lO个高倍 视野(i000倍)，进行PCNA阳性细胞记数。根据检测指标数据绘制动态曲线，各组 间进行统计学分析和比较。 4．统计学处理；所有统计变量以均数±标准误表示，并列出标准差及95％可信 区间，变量值运用SPSSl2．0进行一元方差分析，并对结果行LSO法硬两比较，P蕴 0．05为差异有统计学意义。 犬颈动脉再狭窄相关信号表达的研究 结果 结果 在实验干预的12条犬中，一条犬死于麻醉意外，一条犬于饲养过程中死亡，排 除于实验对象之外，共有10条犬完成实验过程。 1．IGF检测 术前及术后各时闯段的IGF值检测结果见表卜1，方差分析结果P值0．05，各 组均数间差别有统计学意义。 进一步对不同时间段的IGF值行LSD法两两比较，发现术前与术后2小时的P 值O．05．差别无统计学意义；而术后2小时与术后4小时的尸值0，05，差别有 统计学意义：术后4小时与术后6小时的P值O．05，差别无统计学意义：术后6 小时与术后24、48、72小时的尸值均O．05，差别均无统计学意义。不同时间段 的IGF值两两比较结果见表1-2。 术