罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性分析.pdf

郑州大学2005届硕士研究生论文 罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究 罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮 细胞的保护性研究 研究生：李海剑 导师：刘章锁 郑州大学第一附属医院肾病内科 郑州450052 引 言 糖尿病是继心血管病、肿瘤之后第三位威胁人类健康的疾病，由于生活水平 提高，高热量饮食增多，活动减少，人口老化和诊疗技术的进步，糖尿病发病率 在不断上升。糖尿病肾病(diabetic 发症，是导致慢性肾功能不全的常见原因之一。在终末期肾病病人中约三分之一 是由DN引起的，给人类带来极大危害。这个问题促使人们不断寻求有效药物和 手段控制糖尿病及糖尿病肾病的发展。 对糖尿病肾病的研究多年来～直聚焦于肾小球，而占据整个肾脏体积几乎达 90％的肾小管间质却未得到应有的重视。近年来，随着对肾小管问质病变在肾脏疾 病进展与预后中作用的研究，发现肾小管上皮细胞在糖尿病肾病的发生发展中有 着不可忽视的作用。糖尿病状态下，由于尿糖的产生及间质组织、肾小管周围血 管葡萄糖浓度升高，近端小管细胞的顶端侧及基底侧均始终处于高糖环境中。有 研究报道，受高糖影响近端肾小管上皮细胞Ⅳ型胶原(ColIV)、纤维连结蛋白(FD 基因与蛋白水平升高，与此同时转化生长因子13l(TGF_131)基因水平、蛋白表达 及活性上调112】。这些变化，现被认为正是启动和促进小管间质组织纤维化进程的 关键因素，并且该致病作用可能并不完全依赖于肾小球病变，而是导致糖尿病肾病 的独立因素之一。 过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome activated proliferatorsreceptors． 郑州大学2005届硕士研究生论文 罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究 PPARsl，是在1990年发现的一种新的甾体激素受体【3】，它能被一类脂肪酸样化合 物过氧化物酶体增殖物激活，因而被命名为过氧化物酶体增殖物激活受体14】。罗格 增敏剂，是核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体Y(PPA研)的配基，可以调控脂 肪细胞分化和机体的葡萄糖平衡，目前临床上主要作为口服降糖药治疗2型糖尿 病。TZDs与PPARy结合后，诱导核受体发生结构改变将其激活，进而与视黄酸受 体X(RXR)或糖皮质激素受体形成异二聚体，再结合于靶基因的特异性DNA序列 而使靶基因活化，此序列称为过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisome proliferatorsresponsiveelement，PPRE)。靶基因的转录激活导致蛋白合成和生物化 学效应。 由于发现PPARy与脂肪细胞的分化、糖尿病、肥胖、胰岛素抵抗、动脉粥 样硬化形成、抗增生、抗肿瘤及抗炎症等反应关系密切{研，PPART成为近年来的 研究热点，一系列研究表明，除了改善机体胰岛素抵抗等代谢调节作用外，PPARy 配体1’zDS还具有抗炎、影响细胞增殖和转分化、抗脏器纤维化等作用16书】。这 些作用与肾脏疾病有着密切的联系。 但TZDs对高糖环境中肾小管细胞直接作用的相关研究国内外未见报道，为 此，本实验以体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)为对象，给予高糖刺 激，观察PPARy、转化生长因子13 和纤溶酶原激活物抑制因子一1(PAl．1)的表达以及罗格列酮的干预作用，进一 步探讨TZDs对糖尿病肾病的保护作用及其机制。 2 郑州大学2005届硕士研究生论文 罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究 材料与方法 1实验材料 1．1细胞：大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)购自四川大学医学院生化实验室。 1．2试剂： 罗格列酮原粉 北京大学医学部管又飞博士馈赠 四甲基偶氮唑盐(MTr)