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化脓性中耳炎大鼠中耳黏膜细菌生物膜的形成特点及药物清除-耳鼻咽喉科学专业论文
独创性声明
本人郑重声明,本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果的总结。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文 中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。
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日期: 年 月 日
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不保密□。
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学位论文作者签名: 指导教师签名:
日期: 年 月 日 日期: 年 月 日
目 录
主要缩略词及中英文对照1
前 言2
中文摘要6
ABSRACT 9
第一部分 化脓性中耳炎大鼠中耳黏膜细菌生物膜的形成特点及意义 13
材料与方法14
结 果18
讨 论20
附 图23
参考文献26
第二部分 克拉霉素与环丙沙星联合应用对大鼠中耳黏膜铜绿假单胞菌生物膜 的清除作用28
材料与方法29
结 果32
讨 论34
附 图38
参考文献41
综 述43
附 录67
致 谢68
华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文
PAGE 68
主要缩略词及中英文对照
英文缩写英文全称中文全称
AI
autoinducer自诱导分子
AOE
acute otitis media急性中耳炎
BBF CAM CFU
CLSM
bacterial biofilms clarithromycin colony-forming units
Confocal laser scanning microscope细菌生物膜 克拉霉素 菌落形成单位 激光共聚焦显微镜
CPFX
ciprofloxacin环丙沙星
CSOM
EPS
chronic suppurative otitis media
extracellular polysaccharides慢性化脓性中耳炎
胞外多糖
GDMD guanosine diphosphate mannose dehydrogenase
鸟苷二磷酸甘露糖
脱氢酶
OME otitis media with effusion 分泌性中耳炎
PA Pseudomonas aeruginosa 铜绿假单胞菌
QS quorum-sensing 群体感应
SEM scanning electron microscope 扫描电镜
前 言
慢性化脓性中耳炎(chronic suppurative otitis media, CSOM)是耳鼻喉科临 床中最常见的疾病之一,其主要病理学特点是中耳黏膜、骨膜,甚至深达骨质的 慢性化脓性炎症,以中耳腔长期的间断性或持续性流脓、鼓膜紧张部穿孔及听力 下降为主要临床特点,在一定条件下如病变范围进一步扩大可以引起颅内及颅外 并发症,是耳鼻喉科最常见并且难以用药物治愈的感染性疾病之一。铜绿假单胞 菌(pseudomonas aeruginosa, PA)是造成慢性化脓性中耳炎的主要病原体。
随着细菌生物膜(bacterial biofilms, BBF)概念的提出以及对细菌生物膜研究 的不断深入,研究者逐渐认识到许多耳鼻喉科领域反复发作难以根治的慢性感染 性疾病与细菌生物膜有关。1998 年,Rayner 等[1]在对分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)患儿进行鼓膜切开或鼓膜置管术时收集其中耳积液(共 93 份)进行流感嗜血杆菌培养、流感嗜血杆菌 PCR 及 RT-PCR 检查,结果发现: 在 29 份流感嗜血杆菌培养阴性同时 PCR 检测阳性的标本中,均用 RT-PCR 技术 检测到流感嗜血杆菌 mRNA。因细菌 mRNA 的半衰期只有数秒到数分钟,它的 检出提示细菌正在复制。又因为中耳积液细菌培养是阴性,表明这些细菌不是以 浮游菌的形式存在,而很可能是以细菌生物膜的形式存在于中耳黏膜。
目前国内外关于中耳炎性感染疾病细菌生物膜方面的研究,无论是临床病例 研究还是实验动物模型研究,都主要集中在分泌性中耳炎和急性中耳炎(acute otitis media,AOE)上。2005 年,Joseph 等[2]用铜绿假单胞菌建立灵长类动物慢 性化脓性中耳炎模型,发现受感染的中耳黏膜有细菌生物膜形成。2009 年, Michael 等[3]发现慢性
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