和厚朴酚脂质体4周毒代动力学及大鼠肾脏中代谢产物研究-药物分析学专业论文.docxVIP

成都中医药大学 2012 级硕士学位论文 万方数据 摘 要 和厚朴酚（Honokiol），是从中药厚朴中分离、纯化的一种多酚类天然小分 子化合物，具有良好的抗肿瘤效果，课题组前期通过体外和体内动物试验证明其 对非小细胞肺癌 SPC-A1、H460、HCC827、H1975 等裸鼠皮下瘤抑制效果显著， 极有可能是治疗肺癌的候选药物，目前处于临床前研究开发阶段。在前期实验的 基础上，本文采用 UHPLC-MS/MS 联用技术、UHPLC-Q-TOF/MS/MS 联用技术 对和厚朴酚脂质体进行临床前毒代动力学及代谢产物研究。研究内容如下： 1、Beagle 犬血浆样品中和厚朴酚测定方法的建立与验证 采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法（UHPLC-MS/MS）建立 Begale 犬血浆中和厚朴酚的检测方法，并对其进行了系统的方法学验证。结果显示所建 立的分析方法专属性强、线性范围宽，灵敏度、准确度高，重复性好，满足生物 样品分析方法的一般准则，可用作和厚朴酚脂质体在 Beagle 犬体内毒代动力学 研究血浆样本检测。 2、Beagle 犬静脉滴注和厚朴酚脂质体 4 周毒代动力学研究 Beagle 犬 50 只（雌雄各半），随机分为 5 组（首次及末次给药后采样）， 分别为和厚朴酚脂质体低、中、高 3 个剂量组、阴性对照品、空白脂质体对照组， 每组 10 只。每天给药 1 次，连续给药 4 周，分别于首次和末次给药后采集各时 间点血样，采用 UHPLC-MS/MS 方法分析血浆样品。 各剂量组首次与末次给药后 Cmax、AUC(0-t)进行统计学比较，结果显示，低、 中、高剂量组的 Cmax 与 AUC(0-t)统计结果均存在显著性差异。和厚朴酚脂质体低 剂量组、中剂量组和高剂量组的首、末两次 Cmax 值的比值分别为 0.77、1.22、0.77， AUC(0-t)的比值分别为 0.99、1.25、0.70；低剂量组和高剂量组末次与首次给药后 Cmax 与 AUC(0-t)比值均小于 1，中剂量组末次与首次给药后 Cmax 与 AUC(0-t)比值均 大于 1，表明多次给药后，低剂量组和高剂量组的和厚朴酚在 Beagle 犬体内的暴 露水平并没有增加，中剂量组和厚朴酚的暴露水平逐渐增高。各剂量组末次与首 次给药后 Cmax 与 AUC(0-t)比值结果显示，HK 在 4 mg/kg、12 mg/kg 和 40 mg/kg 剂 量组几乎无蓄积。和厚朴酚在 4 ~ 40 mg/kg 剂量范围内具有线性药代动力学特征。 3、和厚朴酚脂质体 SD 大鼠肾脏中的代谢产物鉴定研究 主要研究和厚朴酚在肾脏中的代谢特性。肾脏中含有丰富的与药物代谢相关 Ⅱ相代谢酶，肾脏不仅是药物及其代谢产物排泄的主要器官，也是药物代谢的重 要器官，研究和厚朴酚在肾脏中的代谢途径，对于进一步阐明和厚朴酚在体内代 谢途径，丰富其代谢产物信息是十分必要的。本实验采用 13C 稳定同位素标记技 I  术与 UHPLC-Q-TOF-MS/MS 联用技术测定经尾静脉给药和厚朴酚脂质体后大鼠 肾脏中的和厚朴酚代谢产物。最终，在大鼠肾脏中样品发现了 19 个代谢产物并 对其结构进行鉴定，与尿液、血液、粪便中的代谢物相比，发现了 4 个新的硫酸 酯代谢产物，提出了和厚朴酚在肾脏中的主要代谢途径为硫酸化。本研究丰富了 和厚朴酚的代谢产物库，为其在体内代谢产物的研究提供了重要的补充。 关键词：和厚朴酚脂质体；UHPLC-MS/MS；高分辨质谱；毒代动力学；代谢产 物 II  Abstract Honokiol, is a biphenolic compound isolated and purified from the root, stem bark and the seeds cones ofMagnolia officinalis Rehd. et Wils (Houpu in Chinese). Previous studies have shown that honokiol has strong anti-tumor activities against non-small cell lung cancer, including H460, SPC-A1, HCC827 and H1975 so on. Honokiol may be a potential candidate for lung cancer therapy in the near future and in the clinical research and development stage. Based on the previous experiment, this paper researc