氯化钴作用下大鼠肝癌细胞株RH35的HIF1α与VEGF表达及侵袭性.PDF

７９０ 新医学２０１４年１２月第４５卷第１２期 基础研究论著 氯化钴作用下大鼠肝癌细胞株 ＲＨ３５的ＨＩＦ１ α 与ＶＥＧＦ表达及侵袭性影响的研究 陈俊伟　胡晓俊　林曲　毛军杰　王龙　柏明军　黄明声　单鸿 　　 【摘要】　目的　研究不同浓度的氯化钴 （ＣｏＣｌ）对大鼠肝癌细胞株 （ＲＨ３５）的缺氧诱导因 ２ 子１ （ＨＩＦ１）及血管内皮生长因子 （ＶＥＧＦ）表达的影响，及对ＲＨ３５增殖及侵袭能力影响。方法 α α 利用不同浓度的 （０、５０、１００、１５０、２００ ｍｏｌ／Ｌ）ＣｏＣｌ建立ＲＨ３５缺氧模型。通过ＣｅｌｌＣｏｕｎｔｉｎｇＫｉｔ μ ２ ８（ＣＣＫ８）检测ＣｏＣｌ对ＲＨ３５的体外生长增殖活性的影响。定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）、蛋白免疫印迹法 ２ 及ＥＬＩＳＡ检测ＲＨ３５中ＨＩＦ１及ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ及蛋白表达情况。体外侵袭实验 （Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ）检测 α 细胞的体外侵袭迁移力。结果　ＣＣＫ８显示在ＣｏＣｌ浓度为５０、１００、１５０ ｍｏｌ／Ｌ时，ＲＨ３５细胞体外 ２ μ 生长增殖活性与０ ｍｏｌ／Ｌ无差异 （Ｐ＞００５），在 ２００ ｍｏｌ／Ｌ时，ＲＨ３５增殖活性降为 （６２９０± μ μ １５７）％，与０ ｍｏｌ／Ｌ时比较差异有统计学意义 （Ｐ ００１）。ＱＰＣＲ显示 ＲＨ３５细胞 ＨＩＦ１ 及 μ α ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ表达随ＣｏＣｌ浓度升高而增加，并且ＨＩＦ１ 与ＶＥＧＦ呈显著正相关 （ｒ＝０９８０，Ｐ＝ ２ α ００２０）。蛋白免疫印迹法及ＥＬＩＳＡ显示ＨＩＦ１及ＶＥＧＦ的蛋白表达均随ＣｏＣｌ浓度升高而增加。Ｔｒ α ２ ａｎｓｗｅｌｌ显示ＲＨ３５随ＣｏＣｌ浓度增高，侵袭能力增加。结论　ＣｏＣｌ化学缺氧模型可较好的模拟缺氧 ２ ２ 引起的肝癌细胞ＨＩＦ１ 上调，使ＶＥＧＦ表达增加，并且两者具有相关性；通过上调ＨＩＦ１ 可增加肝 α α 癌细胞的侵袭能力，为下一步实验奠定基础。 　　 【关键词】　肝肿瘤；缺氧；缺氧诱导因子１；血管内皮细胞生长因子；肿瘤侵袭 α ＥｆｆｅｃｔｏｆＣｏＣｌｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＩＦ１ ａｎｄＶＥＧＦ，ａｎｄｔｕｍｏｒｉｎｖａｓｉｏｎｉｎｒａｔＲＨ３５ｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓ　 ２ α ＣＨＥＮＪｕｎｗｅｉ，ＨＵＸｉａｏｊｕｎ，ＬＩＮＱｕ，ＭＡＯＪｕｎｊｉｅ，ＷＡＮＧＬｏｎｇ，ＢＡＩＭｉｎｇｊｕｎ，ＨＵＡＮＧＭｉｎｇｓｈｅｎｇ， ＳＨＡＮＨｏｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲａｄｉｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＴｈｉｒｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳＵＮＹａｔｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３０，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ＨＵＡＮＧＭｉｎｇｓｈｅｎｇ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔ