课件：食品中微生物快速检验技术.ppt

第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 第三节 利用电导率快速分析测试技术 一、 电导率快速检测微生物技术原理 第六章 食品中微生物快速检验技术 第三节 利用电导率快速分析测试技术 微生物在生长过程中利用低电导率的大分子物质(如蛋白质，多肽及碳水化合物等)进行新陈代谢，生成低分子带电荷的分解物，使电导率发生变化。 电信号经放大后显示并记录，检测系统每10分钟检测一次电导率的变化，由计算机实时 监控并自动给出结果。 因此只要先用标准方法对比 做出标准曲线，就可以达到快速 定量检测菌数的目的。 一、 电导率快速检测微生物技术原理 第六章 食品中微生物快速检验技术 第三节 利用电导率快速分析测试技术 样品中微生物数量越多，越快进入对数生长期。培养基电导率发生跃迁的时间越短。 二、 电导率快速检测微生物技术特点 第六章 食品中微生物快速检验技术 第三节 利用电导率快速分析测试技术 1. 采用测量培养基电导(M值)和电极电导(E值)结合的方法，测量相对电导率变化，使灵敏度大大提高，E值测量法尤其适用于一些高盐分(高电导率)的选择性增菌培养基，使电导率法用于致病菌快速初筛成为可能。 2. 对难以测量电导变化的微 生物，采用测间接电导率的方法 ，通过测量KOH吸收微生物代谢 产生CO2后电导率的变化反映微 生物的生长情况。 三、 电导率快速检测微生物技术优势 第六章 食品中微生物快速检验技术 第三节 利用电导率快速分析测试技术 1. 灵敏度高。最低可检测出0.2-1个/mL(克)样品。 2. 可检测样品种类广，检测的微生物项目多。 3. 检测速度快。大部分项目24小时内出结果，样品含菌量越高，出结果越快，只需数小时即给出结果。 4. 检测步骤简单。厂家提供特殊配方的培养基，只需将样品加入培养基中，放入仪器，然后启动程序即可自动出结果。对于液体样品无需复杂前处理，固体样品只需进行必要的均质和稀释即可。 一、 膜过滤荧光染色法原理 第六章 食品中微生物快速检验技术 第四节 膜过滤荧光染色法 2. 标记 3. 激光扫描 1. 过滤 二、 膜过滤荧光染色法步骤 第六章 食品中微生物快速检验技术 第四节 膜过滤荧光染色法 三、 膜过滤荧光染色法仪器 第六章 食品中微生物快速检验技术 第四节 膜过滤荧光染色法 一、利用葡萄糖醛酸酶定量检测E. Coli 大肠杆菌重要卫生学指标，是环境监测、食品安全、卫生防疫监测中必检的一个项目。传统的大肠菌群检测法试验过程繁杂、检测工作量大、费用较高，而且不适合进行大肠杆菌定量检测。 绝大多数大肠杆菌具有葡萄糖醛酸 酶，能分解葡萄醛酸苷。使无色原性- 底物（4甲基伞花内脂β-D葡萄糖苷酸） 生成甲基伞形酮葡萄糖苷酸，在365nm 紫外灯下观察出现蓝亮色荧光，可以实 现定量检测。 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 二、 ATP荧光法检测总菌落数 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 萤火虫会发光是由于它能合成 将化学物质的化学能转变为光能的 生物催化剂—荧光素酶、虫荧光素 (D-luciferin)以及所有细胞生物 都产生的生物能量物质—三磷酸腺苷（ATP）。 在有氧的条件下，虫光素酶催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生化反应式如下： 二、 ATP荧光法检测总菌落数 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 上式表明，只要具备适当条件，不仅萤火虫，即使在试管中 也能发出荧光。当反应系统中，虫光素酶和虫荧光素处于过量 的情况下，荧光的强弱取决于ATP的数量。 在食品样品中，细菌细胞越多，ATP量越高，发出的荧光也 就越强。 所以，在排除样品中非细菌ATP干扰的情况下，通过荧光值 就能确定样品中细菌ATP的含量，从而确定细胞数量。 检测原理 荧光素 荧光素酶 腺苷一磷酸 氧合荧光素 荧光 三、 MTT法检测总菌落数 第六章 食品中微生物快速检验技术 第五节 利用酶促反应定量检测微生物 检测原理为活体微生物线粒体中含有琥珀酸脱氢酶，能使外源性MTT（噻唑蓝）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 Formazan结晶形成的量与活菌数成正比。用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值， 可间接反映活菌细胞数量。