高密度脂蛋白促进脂肪干细胞增殖机制的研究-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研 究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机 构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均 已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和 借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部 门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分 内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。 作者签名： 导师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 学位论文知识产权声明 本人在就读研究生期间所完成的学位论文以及相关结果，知识产权归属 汕头大学医学院。本人在毕业离校前会将有关的研究资料和结果全部上交导 师，离校后发表或使用学位论文或与学位论文直接相关的学术论文或成果时， 须征得导师及导师所在单位的同意，并要求署名单位仍为汕头大学医学院。 本人不得以本论文的研究成果申报研究课题。导师和导师单位可以将学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描 等复制手段进行保存、汇编学位论文，可以公布（包括刊登）论文的全部或 部分内容。导师及导师所在单位享有发表学位论文、申请成果和专利的权利。 注：保密的学位论文在解密后适用本声明。 研究生签名： 日期： 年 月 日 导师签名： 日期： 年 月 日 汕头大学医学院硕士论文 中文摘要 背景和目的： 脂肪干细胞作为最近发现的一类分布广泛，获取容易，分化能力较强 的间充质干细胞，正在引起越来越多的关注；相较于骨髓来源的干细胞，脂肪干细胞具有 更明显的优势，因此，对于脂肪干细胞，科研工作者们寄予了很大的期望；同时，令人关 注的是，脂肪干细胞进入机体后发生的变化，是否具有体外实验那样令人兴奋的效果。 高密度脂蛋白作为人体内维持胆固醇平衡，脂类代谢的一种重要脂蛋白，还具有抗氧 化，抗动脉粥样硬化等功能，在保护血管功能，维持机体稳态中发挥不可缺少的作用。有 报道证实，高密度脂蛋白对于血管内皮细胞，血管平滑肌细胞等具有促增殖，抗凋亡的保 护作用。 本研究聚焦于上述两点，重点探讨了高密度脂蛋白对于脂肪干细胞的影响，针对高密 度脂蛋白促进脂肪干细胞增殖这一现象，进行了分子机制上的探究。通过一系列的实验以 调查，高密度脂蛋白是否对于脂肪干细胞存在促进增殖的作用。 方法： 从健康志愿者血液中分离出血浆，利用密度梯度离心的方法，分离出高密度 脂蛋白；分离出小鼠脂肪干细胞并传代培养鉴定，人源脂肪干细胞从美国模式培养物集存 库（ATCC）购买；通过细胞水平实验，利用不同浓度的高密度脂蛋白和不同时间点处理 两种脂肪干细胞，以 MTT 和 BrdU 鉴定细胞增殖效果；通过 Western blotting 实验，验证相 关信号通路关键蛋白质分子和若干细胞周期关键蛋白质分子的表达量变化，说明高密度脂 蛋白促进脂肪干细胞增殖作用的分子机制。 结果： 通过密度梯度离心法成功分离出高密度脂蛋白；MTT 实验和 BrdU 实验均证 实高密度脂蛋白可以促进脂肪干细胞的增殖；Western blotting 实验表明，信号通路关键蛋 白 p-Akt 和 p-ERK1/2 的水平明显上调，细胞周期蛋白 D1 和细胞周期蛋白 E 表达量上升， 而细胞周期阻抑蛋白 p21 和 p27 表达量下调。 结论： 高密度脂蛋白可以促进脂肪干细胞的增殖；通过脂肪干细胞膜表面 S1P1 受体， 促进细胞周期蛋白 D1 和细胞周期蛋白 E 的表达量上升，并且下调细胞周期阻抑蛋白 p21 和 p27 的表达，促进细胞周期进程，进而实现促进细胞增殖的效果。 【关键词】高密度脂蛋白;脂肪干细胞;信号通路;细胞周期 I 汕头大学医学院硕士论文 Abstract Background and Objective: Recently compared to the bone marrow stem cells, adipose derived stem cells (ADSC) are showing more significant advantage and attracting more attention, as a class of wide distribution, easy to obtain and with stronger differentiation ability of mesenchymal stem ce