AMPK抑制冠状动脉平肌细胞增殖的机理分析.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘要摘要 摘要 摘要 【目的】血管平滑肌细胞的增殖在动脉粥样硬化以及血管成形术后再狭窄的发 生和发展过程中起了至关重要的作用。有大量的研究证实，体外培养的猪冠状 动脉血管平滑肌细胞是一个适合用于研究冠状动脉血管疾病及其相关机制的模 型。磷酸腺昔激活的蛋白激酶(Adenosine monophosplate．activated protein 1(iI粥e， 舢MPK)是一种重要的蛋白激酶，能感受到细胞内AMP的浓度以及AMP／ATP 比值上的变化，在真核生物细胞中，是细胞应对低能量状态的主要调节器。 我们以原代分离培养的猪冠状动脉血管平滑肌细胞(Porcine coronary artery smooth muscle cells，PCASMCs)和猪冠状动脉组织为模型，并辅以小鼠颈总 动脉结扎模型，探讨AMPK的激活是否影响血管平滑肌细胞尤其是冠状动脉平 滑肌细胞的功能和增殖，以期为AMPK作为抑制冠状动脉增殖性疾病的靶点提 供有效数据。 【方法】AICAR(5．Aminoimidazole-4-carboxamide．1．B．D-ribofuranoside)是AMPK 的激活剂，用其处理体外分离培养的猪冠状动脉血管平滑肌细胞，通过WST-1 和细胞计数检测平滑肌细胞的增殖。之后，通过westernblot检测AMPK的磷酸 化水平及p44／42 MAPK的磷酸化水平。以及其下游的p27、PCNA等的表达。 通过检测凋亡相关蛋白easp鹊e．3的表达，检测AICAR处理的猪冠状动脉血管 平滑肌细胞是否出现凋亡。与此同时，通过myography血管功能实验检测AICAR 对猪冠状动脉收缩、舒张功能的影响，以及AICAR对小鼠颈总动脉结扎后结扎 位点新生内膜形成的影响。 【结果】AICAR激活的AMPK处理后能够明显的抑制血清诱导的猪冠状动脉血 管平滑肌细胞的增殖，并且这种抑制作用是剂量依赖的。AICAR处理的猪冠状 动脉血管平滑肌细胞，其AMPK磷酸化水平明显升高，且p44／42 MAPK磷酸化 水平受到明显的抑制，但AMPK通路相关的p27、PCNA等蛋白表达量没有明 显的差异，且凋亡相关蛋白easpase-3也并未检测到发生剪切，说明AICAR不 会导致猪冠状动脉血管平滑肌细胞的凋亡。且其可能是通过抑制p44／42 MAPK 的磷酸化来抑制细胞增殖的。myography血管功能实验显示AICAR抑制Aeh诱 导的猪冠状动脉血管收缩；并且AICAR能引起Ach诱导的收缩后的血管舒张。 摘要而 摘要 而AICAR处理3周的小鼠颈总动脉结扎模型，其新生内膜的形成受到明显的抑 制。 【结论】1．AMPK的激活能够明显的抑制猪冠状动脉血管平滑肌细胞的增殖； 2．AMPK激动剂AICAR能够引起猪冠状动脉的舒张；3．AICAR抑Nd,鼠血 管的重塑。 关键词舢订PK；冠状动脉；血管平滑肌细胞；AICAR AbstractAbstract Abstract Abstract oBJEC’I’IVE： 111e proliferation of vascular smooth muscle cells(VSMCs)plays an important part in the development of various vascular diseases，including atherosderosis，and post-PTCA restenosis．A large number of studies confirmed that porcine coronary artery smooth muscle cells cultured in vitro is a suitable model for studying the mechanisms of coronary artery disease．The enzyme adenosine monophosplate -activated protein kinase(AMPK)is an important protein kinase，it tail detect the concentration of cellular姗and the ehange of AMP／ATP ratio．It is a major energy sensor of cellular energy status found in all eukaryotic cells．Porcine coronary artery smooth muscle cells(PCASMCs)cultured in vitro was selected as a model，jus