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多肽与寡核苷酸缀合物合成方法的研究进展 　　第卷第期王兰等多肽与寡核苷酸缀合物合成方法的研究进展 ………? 综述与进展 ………一化学试剂—多肽与寡核苷酸缀合物合成方法的研究进展王兰?卢奎?”马丽。赵东欣河南工业大学化学化工学院河南郑州河南工程学院化学系河南郑州摘要寡核苷酸在有选择性的抑制基因表达方面具有相当大的潜在应用价值。但因寡核苷酸的细胞透过性较低且易被核酸酶降解使其应用受到了限制。许多生物活性多肽具有较高的细胞透过性通过化学键将寡核苷酸和多肽连接起来可以提高寡核背酸的细胞透过性及对核酸酶的拮抗能力。综述了多肽与寡核苷酸常用的连接方式并讨论了各自的特点。关键词多肽寡核苷酸缀合物合成进展中图分类号文献标识码文章编号寡核苷酸在疾病的治疗及基因功能研究等方面具有及其重要的应用价值但其对核酸酶的拮抗能力及透过细胞膜的能力较弱使其应用受到了限制?。。许多多肽具有较高的细胞透过性。若将多肽与寡核苷酸以共价键的形式相结合形成缀合物则可提高寡核苷酸对细胞的透过性及对核酸酶的拮抗能力旧。多肽与寡核苷酸缀合物的合成方法常用的主要有液相合成法和固相合成法但其连接方式有很多种。目前常用的连接方式主要有以肟键、酰胺键、硫醚键、二硫键、磷酰键、腙键、酰脲键等方式相连接的。通过肟键连接此种方法首先是在寡核苷酸肽上引入醛基然后与连有羟胺的多肽寡核苷酸在 —的磷酸缓冲溶液中反应生成肟。醛基可以结合在寡核苷酸多肽的不同位点其引入主要有两种途径其一是引用部分被保护的醛如乙缩醛基另一种途径是引入对称的保护基团如 一丙二醇然后经高碘酸盐氧化就可得到醛基。 　　? 报道利用这种方法合成了连有两个醛基的寡核苷酸和多 等 　　肽的缀合物。目前这种方法已经被进一步的应用于标记寡核苷酸与 ??及 芯片技术中。通过肟键连接的优点是在形成缀合物过程中原料原有的生物活性不会被破坏由于肟键的形成具有化学选择性因此不需要对官能团进行保护或活化该连接方法的缺点是 丙二醇在酸性条件下易发生异构化作用导致有副产物的生成。 ‖ 　　— …枞 ?一? 了。 。?岫也? 少 、 一 ? 、 ?? 肚或醋通过肟键连接形成的缀合物 　　通过硫醚键连接多肽与寡核苷酸通过硫醚键形成缀合物是应用较广的方法之一。硫醚键的形成主要有以下种方法用的最多的是一、二两种方法。方法一是首先用巯基对寡核苷酸的?或?位进行修饰然后与 端用溴乙酰基进行修饰的多肽在 的缓冲溶液中进行反应。方法一、飞 　　— 方法二? 川一 掣 —文 丫 —丫 ??其中肽寡核苷酸常用硫醚键的连接方式 　　收稿日期基金项目国家自然科学基金资助项目河南省教育厅科技计划资助项目 　　。作者简介王?兰一女河南唐河人硕士主要研究方向为化学生物学。凡出万方数据化学试剂年月 等报道利用这种方法合成了多肽与寡核苷酸 起始区域互补的缀合物。方法二是首先在寡核苷酸多肽上引入一个马来酰亚胺官能团然后与连有巯基的多肽寡核苷酸在 —磷酸溶液中进行反应生成酰亚胺一硫醚键。 　　等”。最早利用这种连接方法合成了一系列含半胱氨酸的多肽与含马来酰亚胺官能团寡核苷酸的缀合物。 等?报道在寡核苷酸的?位引入酰亚胺基多肽上引入巯基通过酰亚胺一硫醚键连接的方法得到了产率为的肽与寡核苷酸的缀合物。将多肽与寡核苷酸通过硫醚键连接形成缀合物得到了有关人士的大力推荐其优点是 　　通过该方法得到的缀合物产率较高与不带多肽的寡核苷酸相比缀合物抗 的能力提高了。不足之处是多肽及寡核苷酸上的氨基也会和马来酰亚胺上的双键加成且该连接方法需先在多肽和寡核苷酸上引入特定的官能团步骤较为繁琐。 　　— — 一 — — — — 一— 一 坚里 　　— 一 —一—扣一 弘一 — —棚一 也 通过硫醚键连接形成的缀合物 　　通过酰胺键连接该方法首先是在寡核苷酸上引入氨基然后与末端羧基活化的多肽反应形成酰胺键。 　　等报道利用该方法合成了带丝氨酸的多肽和寡核苷酸的缀合物。 　　等是采用光敏感的连接分子合成寡核苷酸在光照条件下将带保护的寡核苷酸切割下来并在?位引入氨基。为使多肽链中侧链保护基的脱除与寡核苷酸的脱保护条件一致他们首先将丝氨酸的侧链羟基用乙酰基保护在弱酸条件下将合成的肽从 树脂上切割下来在、『 、『一二甲基甲酰胺中将多肽的 端活化然后与末端经氨基修饰的寡核苷酸通过酰胺键形成缀合物。原则上寡核苷酸的任一磷酸骨架或碱基都可被带氨基或羧基的官能团修饰但若选择对寡核苷酸链的末端?位进行修饰可以避免寡核苷酸在形成缀合物后原有的生合成和去保护 通过酰胺键连接形成的缀合物 物活性被削弱。 等旧报道在寡核苷糖环的位引入丙二醇然后氧化成醛再氧化