高花青素毛状根生物反应器的创制-植物学专业论文.docxVIP

万方数据 青海师范大学学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进 行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特 别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青海师范大学或 其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工 作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确 的说明并表示了谢意。 研究生签名： 日期： 青海师范大学学位论文使用授权声明 青海师范大学、中国科学技术信息研究所、国家图书 馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可 以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文 档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密 论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括刊登） 论文的全部或部分内容。论文的公布（包括刊登）授权由 青海师范大学研究生部办理。 研究生签名： 导师签名： 日期 I  万方数据 高花青素毛状根生物反应器的创制 中文摘要 花青素是一类广泛存在于被子植物及少数裸子植物细胞液中的水溶性色素。 因其特殊的化学结构，在不同酸碱性条件下能够使植物器官呈现不同的颜色如粉 红、天蓝、紫色等。花青素属于黄酮类物质，具有抗癌、抗炎抗菌、抗衰老、降 血糖、保护肝脏等功效。花青素主要在植物的花、果实、块茎中积累，然而目前 主要来源于产量较高的水果和蔬菜中（黑枸杞、蓝莓、葡萄、 HYPERLINK /view/38596.htm 黑加仑、 HYPERLINK /view/489199.htm 紫甘薯、 红甘蓝等）来源较为单一。从更多的植物中获取花青素成为了扩充花青素资源库 的有效手段。本研究拟通过在植物毛状根中过量表达调控花青素合成代谢的 MYB 和 bHLH 基因，获得高花青素的生物反应器，并对获得花青素的种类进行验证。 实验结果如下： 1、Gateway 技术构建调控花青素合成代谢的 MYB 基因 AmROS1 和 bHLH 基因 AmDEL 的遍在表达载体，利用电转法将表达载体转至发根农杆菌 Ar1193 中。通 过发根农杆菌介导转基因法侵染烟草及大牵牛叶片使 AmROS1 和 AmDEL 在毛状根 中过表达，获得高花青素毛状根，其转化率为 40%，在‘Samsun’烟草的毛状根中花 青素占干重的 1.46%。 2、利用并通过高效液相-质谱联用仪分析了毛状根中花青素的种类。毛状根 中花青素化合物种类与花中相同，毛状根和花的出峰时间分别在 11.27min 和 11.38min。毛状根中花青素的分子量为 595.1Da，花中花青素的分子量为 595Da。 毛状根及花中花青素均有矢车菊素连接一个咖啡酸和一个阿魏酸。 3、大牵牛花中 HBA 的分子量为 1745.5Da，其结构由一个矢车菊素、6 个葡 萄糖、3 个咖啡酸组成，。在大牵牛高花青素毛状根中含有 12 个峰和 10 类花青 素类化合物。它们的分子量在 773-111.4Da 之间。其中分子量在 773Da 的一类花 青素化合物含有一个矢车菊素和 3 个葡糖糖，分子量在 1111.4Da 的一类花青素 含有一个芍药素和 5 个葡萄糖。在大牵牛毛状根中没有发现 HBA，而毛状根中检 测到了 HBA 中不存在的阿魏酸。 本研究通过在毛状根中过量表达调控花青素合成代谢的 MYB 基因 AmROS1 和 bHLH 基因 AmDEL，成功获得了高花青素的毛状根生物反应器，并且获得的花青素 种类多样，拓宽了花青素的来源。 关键词：花青素、转基因、生物反应器、毛状根 I Constrcting the hariy root bioreactors with high anthocyanins content Abstract Anthocyanins are a class of liquid water soluble pigment, existing widely in angiosperms and gymnosperms. Because of its special chemical structure, it can make the lant organs show different colors like pink, blue, purple, etc. in different PH conditions. Anthocyanins are one kind of flavonoids, and have the function of anticancer, anti-inflammatory anti-bacterial, anti aging, reducing blood sugar, protecting liver function.