eb病毒转化的淋巴细胞永生细胞株长期传代后的遗传稳定性-遗传学专业毕业论文.docxVIP

中困医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 颂．J：研究生学位论文 中文摘要 用EB病毒转化外周血B淋巴细胞建立的永生细胞株，因其可以在传代培 养的条件下，源源不断地为各种遗传性疾病、免疫学、细胞生物学研究提供DNA 和细胞而在基础生命科学研究中受到重视．本实验的目的是检测传代培养的永生 细胞株在长期传代的过程中细胞和分子遗传学方面能否保持稳定，这关系到评价 永生细胞株提供DNA的科学研究实验结果准确性的重要问题。 本实验从染色体、高突变微卫星位点及端粒酶活性三方面选取10株永生细 胞株对永生细胞株的细胞和分子遗传学特征进行检测。在染色体方面，细胞株每 隔10代，即10代、20代 时，取出进行染色体标本的制备，统计细胞株分 裂相及亚二倍体、超二倍体和多倍体的发生率。在微卫星位点检测方面，从核基 因组和线粒体基因组上分别选取突变率0．09％的13个位点及D．100p区高突变 的2个位点，对细胞株的血样及每隔lO代取出的细胞抽提的DNA用PCR扩增 进行变性后，以聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纵向比较，检测在这些高突变的位点区 域是否有突变的发生。在细胞株端粒酶活性检测方面，将10株细胞株在培养过 程中的不同代次取出，以Hela细胞株的细胞提取液作为端粒酶实验的阳性对照， 进行端粒酶活性检测。 检测结果表明，本研究室采用EBV转化B淋巴细胞建立的永生细胞株在传 代培养的30代之内遗传特征是稳定的。继续传代培养后，细胞株的生长速度减慢， 细胞分裂相减少，其中细胞株Ya056和Ya043分别在30代和60代后分裂相出现多 倍体，而Ya0225和Ya0230在50代后死亡。10株细胞株中，Ya0262传至60代时在 位点D13S317检测出突变， 其余细胞株80代以前15个高突变STR位点未检测出 有突变的发生。所有细胞株在80代前(包括80代)未检测出端粒酶活性。 4  中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 硕士研究生学位论文 ABS‘l。RAC。l。 B lymphoid cells from human peripheral blood Can be transformed into actively proliferating immortalized cell line by Epstein—Barr virus(EBV)．The immortalized cell line，够sources of DNA and cells,a糙used widely in researches in etiology， immunology and cellular biology．Therefore，in order to ensure reproducible results and continuity in research of life science：it is important for immortalized cell line to remain its genetic stability,even after a long subculture process． In the present study，the genetic stability including chromosome diploidy， microsatellite DNA and telomerase activity were evaluated．We calculate the frequencies of hyperdiploid,hypodiploid and polyploidy of immortalized cell line with the chromosome banding techniques every 1 0 passages．For 1 3 STR loci wim a mutation rateO．09％in nuclear genome and 2 STR loci、vinl a high-frequency mutation in D—loop of mitochondrial genome，the amplication products of DNA extracted from the blood and the cell line every 1 0 passages were detected by polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)．During the subcultureing process，the telomerase activity in the cell lines were