精氨酸与纤维连接蛋白联合应用对深ⅱ度烧伤创面愈合的流影响的分析.docx

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 一獬诹一絮掌管警莲麓 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外；文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签咖导师签名：方≯秒穆 二彦年；月-日 中文摘要精氨酸与纤维连接蛋白联合应用对深II度烧伤创面 中文摘要 精氨酸与纤维连接蛋白联合应用对深II度烧伤创面 愈合影响的研究 摘 要 目的：通过制作大鼠背部皮肤深II度烧伤模型，给予大 鼠模型强饲L．精氨酸(L．arginine L．Arg)，并在烧伤创面局 部联合应用纤维连接蛋白(fibronectin FN)，干预创面愈合过 程，从而观察L．精氨酸与纤维连接蛋白联合应用对深II度烧 伤创面愈合速度和愈合质量的影响；并通过免疫组织化学方 法揭示烧伤愈合过程中一氧化氮合酶(NOS)的表达规律； 通过光镜观察愈合期间不同阶段的成纤维细胞数量及胶原 纤维的含量变化；通过生物化学方法检测肉芽组织中羟脯氨 酸含量；通过实验前后对比，观察创面的愈合状况。研究L． 精氨酸与纤维连接蛋白对深II度烧伤创面愈合的影响，为临 床探索促进烧伤创面愈合的有效方法，并为进一步深化烧伤 创面愈合修复的临床研究提供实验依据。 方法：1、实验动物：雄性健康Wistar大鼠60只，称重， 编号。2、实验动物分组：将大鼠随机分为4组：即对照组 (O．9％生理盐水)、实验A组(L．Arg 400mg／kg／d联合 O．5mg／ml的FNO．05m1)、B组(L．Arg 400mg／kg／d)、C组 (O．5mg／ml的FN0．05m1)。每组15只。3、深II度烧伤模型 制备方法：大鼠用3％戊巴比妥腹腔注射麻醉(35mg／kg)， 背部剪毛，8％硫化钠脱毛，温清水清洗，拭干。饲养24小 时后用同法戊巴比妥腹腔注射麻醉成功后，将大鼠俯卧位固 定于手术台上。在背部脊柱两侧旁开lcm，头尾两端平行于 中文摘要脊柱各标记一个边长为1．5cm，面积为2．25cm2的正方形预 中文摘要 脊柱各标记一个边长为1．5cm，面积为2．25cm2的正方形预 处理标记线。用相同面积的煤油纱布覆于背部的标记线内， 用湿纱布保护周围皮肤后，点燃煤油纱布并使之燃烧lO秒 后用生理盐水纱布盖灭，形成4个正方形深II度烧伤创面(病 理证实，图3)。取O．5mg／ml的FN0．05ml注射于实验A组和 C组每个创面筋膜层及创面皮下组织内，对照组和实验B组 给予0．9％生理盐水辅料包扎。待大鼠清醒后，按照 400mg／kg／d计算并分别给与实验A组和B组L．Arg灌胃。 隔日换药一次(处死动物当天不换药)。实验A组和C组每 天每个创面注射O．5mg／ml的FN0．05ml，直至动物处死。4、 取材：每组动物分为5组，每组3只，分别在术后3、5、7、 14、2l天切取原烧伤范围内皮肤组织全层，随机将一块组织 固定在4％多聚甲醛中，常规石蜡包埋，切片，分别行常规 HE染色、Masson染色及免疫组化染色。剩余的组织于．20℃ 冷冻保存，行组织化学检测。5、观察指标：(1)大体观察。 (2)成纤维细胞数密度(numerical density on area，NA)：400 倍光镜下观察HE染色切片，在肉芽组织中央浅部、中央深 部、两侧部各随机选取10个矩形视野(O．0052mm2／视野)， 目测计数并计算切片内单位面积成纤维细胞数量，结果取均 数。(3)胶原纤维面密度(area density on area，AA)：Masson 染色组织切片，在肉芽组织中央浅部、中央深部、两侧部个 随机选取5个视野，利用计算机辅助病理图像分析系统，计 算绿染的胶原纤维的面密度，结果取均数。(4)按照羟脯氨 酸测定试剂盒说明书操作测定肉芽组织羟脯氨酸含量。(5) 对免疫组化染色切片，光镜观察NOS2分布部位和着色深浅 程度。采用数码医学图像分析系统，测阳性细胞比率。6、 中文摘要统计学处理：用SPSS 中文摘要 统计学处理：用SPSS 12．0 for windows统计软件，采用单因 素方差分析方法进行统计学处理，数据以x士s表示，P0．05 为差异有统计学意义。 结果：l、形态学观察：对照组于创伤后20～2l天可以 基本愈合；实验A组肉芽组织生长良好，愈合时间较对照组 提前3~4天。实验B组、C组愈合情况良好，较对照组提前 1～2天。2、光镜观察：实验A组在烧伤后3天，5天，7天 比对照组和实验B组、C组均有较多的毛细血管形成，烧伤 后14天，21天成纤维细胞，胶原纤维排列整齐；实验B组、 C组在烧伤后3天，5天，7天虽也有较多的毛细血管形成，