解淀粉芽孢杆菌peba20群体感应基因族的克隆及相关特性不研究-植物病害生物防治专业毕业论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体， 均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文 收录到《中国学位论文全文数据库》并向社会公众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导师签名： 粤攀噔坐 日 期： 望f．b、 万方数据 英文缩略词及中文对照表 英文缩略词及中文对照表 万方数据 山东农业大学硕士专业学位论文目录 山东农业大学硕士专业学位论文 目录 中文摘要 ．I Abstract ． ．．．． ． ． ．．II 1引言 1 1．1群体感应系统 ．1 1．1．1群体感应系统的概念 ．．1 1．2群体感应系统的分子调控机制 ．2 1．2．1枯草芽孢杆菌群体感应调节的分子机制 ．．2 1．3群体感应系统与生物膜 ．．7 1．3．1生物膜 7 1．3．2群体感应系统与生物膜之间的联系 7 1．4基因打靶技术 10 1．4．1同源重组技术 ．．10 1。5本研究的目的及意义 lO 2材料与方法 ．．11 2．1材料 11 2．1．1菌株与质粒 ．．11 2．1．2仪器与试剂 ．11 2．1．2．1仪器 ．11 2．1．2．2生化及分子生物学试剂 ．．11 2．1．3溶液与培养基配置 ．12 2．1．3．1溶液配制 ．12 2．1．3．2培养基配制 ．12 2．2试验方法 ．13 2．2．1 B．amyloliquefaciens PEBA20群体感应基因comQXPA基因克隆 ．13 2．2．1．1基因组DNA的提取(CTAB／NaCl法) 13 2．2．1．2群体感应comQXPA基因的PCR扩增 ．13 2．2．1．3琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 14 2．2．1．4 PCR产物回收 ．15 2．2．1．5 PCR回收产物和pMDl8．T克隆载体的连接 16 万方数据 解淀粉芽孢杆菌PEBA20 解淀粉芽孢杆菌PEBA20群体感应基因簇的克隆及相关特性研究 2．2．1．6 E coli DH5a感受态的制各(采用CaCl2法) 16 2．2．1．7连接产物转化E coli DH5a j 16 2．2．1．8菌落PCR检测 16 2．2．1．9质粒提取 ．17 2．2．1．10序列测定 ．17 2．2．1．11序列分析 18 2．2．2 coma基因突变株的构建 18 2．2．2．1 coma基因突变株构建方法设计 18 2．2．2．2突变引物设计 19 2．2．2．3 PEBA20基因组DNA的提取(CTAB／NaCl法) 19 2．2．2．4 comA基因同源前、后臂的PCR扩增 ．．20 2．2．2．5同源前臂comAF与同源后臂comAB的克隆 ．．21 2．2．2．6 comaF与comaB的单酶切 ．21 2．2．2．7 comaF与comAB酶切产物的连接 21 2．2．2．8 comaF．comAB与pMDl8．T连接 ．．21 2．2．2．9 comAF．comAB—pMDl 8．T的转化及验证 22 2．2．2．10自杀质粒pkl8mobsacB的提取 22 2．2．2．11 comAF—comAB-pMDl8一T与自杀质粒pkl8mobsacB的双酶切 22 2．2．2．12 comAF—comAB·pMDl8·T与自杀质粒pkl8mobsacB双酶切产物的连接 22 2．2．2．13 comAF．comAB．pkl8mobsacB转化E coli T1及PCR验证 23 2．2．2．14 comAF．comAB．pkl8mobsacB质粒的提取及PCR验证 ．23 2．2．2．15 PEBA20感受态细胞的制备 ．23 2．2．2．16 comAF．comAB．pkl8mobsaeB转化入PEBA20感受态细胞 ．．23 2．2．2．17卡那筛选一次重组PEBA20菌体及PCR验证 。23 2．2．2．18筛选二次重组PEBA20菌体 ．24 2．2．2．19二次重组PEBA20菌体的验证 24 2．2．3 coma突变株的生物膜表型测定 24 2．2．3．1comA基因缺失突变株固气