《-第二章海藻组织培养技术》-课件设计(公开).pptVIP

第三节 海藻组织培养概况; 根据海藻材料的不同，海藻组织培养分为： 海藻切段培养 海藻愈伤组织培养 海藻细胞培养 海藻原生质体培养 ;二、海藻组织培养研究历史;早期的海藻组织培养研究遇到了两大难题： ①获得无菌材料困难：海藻的表面寄生物多，且生长牢固，难以去除，必须采用剧烈的刷洗，而海藻的外表皮细胞无角质层类的保护层，很容易受损伤；同时由于寄生的微生物种类多，数量大，所用的消毒剂和抗生素的量需加大，极易造成外植体畸形或死亡； ②海藻的基础研究落后，缺乏控制其生长和分化的x相关知识。;海藻的生活环境复杂具有许多不同于高等植物的特性，使得组织培养研究进展相对缓慢。 从20世纪80年代开始，进行了许多海藻表面消毒和无菌孢子获得方法的研究。 各种新的抗生素和清洗技术应用到大型海藻的组织培养中，许多海藻成功的实现了组织培养。 同时对于愈伤组织产生的诱导条件进行了详细的研究，包括各种培养条件，不同的培养基，产生部位以及来源（组织块，细胞，原生质体）。;对于影响愈伤组织形成的物理因子，包括渗透压，琼胶强度，盐度（Robaina et al.1990，Yokoya et al.1999），营养盐包括甘油、有机碳源(Garcia-Jimenez et al.1998)，植物生长调节物质(BradleyCheney 1990，YokoyaHandro 1996，Yokoya 2000) 等进行了详细的研究。 据统计迄今已有六十余种大型海藻通过原生质体、组织切块实现了再生培养。 ;三、海藻组织培养的应用;海藻组织培养主要应用在：;① 种苗培育研究 海藻种质库：我国在大型经济海藻的养殖与应用方面一直处于国际领先地位，同时也是少数几个具有大型海藻种质库的国家之一，目前已保存了海带、裙带菜、紫菜的多个品系。 苗种生产：利用植物离体繁殖进行大规模的苗种生产。目前，已在经济海藻的苗种生产研究中取得了一定的进展。;刘凤贤（1990）用壳聚多糖可将鹧鸪菜切段长成再生苗；朱仲嘉等（1992）羊栖菜组织培养芽生苗；裴鲁青等（1993）石花菜切段再生。 贺丽虹等（2004）条斑紫菜单细胞固体培养成苗；曾庆国等（2004）以坛紫菜单个体细胞克隆培养获得的叶状体，再用组织培养技术形成纯和丝状体，然后进行海上养殖等。;② 次生代谢产物的生产;热带红藻Ochtodes secundiramea含有的多种卤化类萜化合物（Maliakal等2001），可以通过月桂烯合成酶（Wise等2002）和海洋溴过氧化物酶（Roner等2001）产生。 另外，从海藻组织培养中还可以生产有用的药物或其他活性物质如胡萝卜素、红藻色素等。;四、海藻组织培养操作;1、培养基的配制; 海藻组织培养培养基（海水加富型培养基）主要有： 培养褐藻的PESI培养基； 培养红藻和绿藻的PES培养基、MES培养基、VAS培养基； 培养一般海藻的Erd（-shreiher）培养基和ESS培养基。;16;人工海水培养基 这种培养基，在对海藻营养要求进行调查和调整及生理生化过程的研究时采用，适用于海藻的一般性无菌培养，主要有： 绿藻常用Asp1培养基、Asp7培养基； 红藻常用Asp2培养基、Asp6培养基； 褐藻常用Asp12培养基； 绿藻常用KDX培养基。 ;18;MES培养基配制步骤：;③ MES培养液的配制 1000mL MES培养液 = 20mL MES enrichment 原液 + 980mL 消毒海水 ④ 熔化琼脂 电炉加热至琼脂熔化，将配制好的混合培养液加入到琼脂中，定容。 ⑤ 调pH 正常海水的pH值一般为8.1-8.3。 用1mol/L NaOH溶液调pH ⑥ 培养基的分装 用锥形瓶分装，培养基的量约为锥形瓶容量的1/5~1/4，用2块硫酸纸中间夹1层牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎，贴标签，待消毒。;2、外植体的选择与消毒;最适于用作组织培养的外植体是靠近藻体生长部的分生组织，健康无毒。 组织部位、植株年龄、取材季节以及植株的生理状态和质量都对培养时器官的分化有一定影响。;外植体消毒: 消毒的尺度是既能全都杀灭外植体上附带的微生物，而又不伤害植物材料的生活力。一般使用消毒海水反复清洗进行藻体消毒，或者用碘化钾或次氯酸钠溶液进行藻体表面消毒。 海藻组织培养只能做到少菌而不能真正做到无菌。;表1 常用消毒剂的使用和效果（引自潘瑞炽，2001）;如果海藻外植体确实需要无菌，可以使用抗生素消毒，但成功率不高。 使用一定浓度的抗生素浸泡一定时间，每隔一定时间挑出外植体进行无菌检测，直到确实无菌为止。 培养基中应该含有300ug/mL的青霉素 G（ Penicillin G ）、100ug/mL的硫酸链霉素（ S