乳酸脱氢酶及其说辅酶I的作用.pptVIP

乳酸脱氢酶及其辅酶I的作用 乳酸脱氢酶由酶蛋白和辅酶I组成，两者单独存在时，无催化活性，必须共同存在组成全酶才起作用。乳酸脱氢酶在各种组织细胞广泛存在，它可逆地催化乳酸脱氢形成丙酮酸或丙酮酸接受氢生成乳酸。在代谢过程中，有重要意义，反应中由辅酶I（NAD＋）起传递氢作用。乳酸脱氢酶属于不需氧脱氢酶，不能直接将氢交给氧，反应中生成的还原型辅酶I，可与其它酶蛋白结合，将氢传给其它的递氢体，通过呼吸链被彻底氧化。 试验原理： 本实验以乳酸为底物。用新鲜的动物肌肉的粗制提取液，分别制成酶蛋白部分（用白陶土吸附除去辅酶I）和辅酶部分（加热破坏酶蛋白），观察两者单独作用及共同作用。实验中为了便于观察，用甲烯兰（即美兰）做为受氢体。已知甲烯兰能从还原型黄酶接受氢而由蓝色变成无色（甲烯白）。所以本实验中根据溶液兰色的消退判断乳酸脱氢反应的发生。 操作步骤： 1、分别制备酶蛋白提取液及辅酸I提取液 （1）除去辅酶I的酶蛋白提取液：取新鲜动物肌肉组织3g，剪碎放研钵中加玻璃砂约 0.5g，白陶土 0.5g，加 PH7.4 0.1M磷酸缓冲液8ml，研细成粥状。移入离心管中，以2000rpm离心5分钟，倾于另一试管中备用。 （2）辅酶I提取液：取蒸馏水10ml于中试管中，加热煮沸。取新鲜的肌肉组织3g，剪碎，放入沸水中，继续煮沸10分钟，为防止水分过多蒸发可加盖。稍冷后倾入乳钵中研细，移入离心管中2500rpm离心5分钟，取上清液备用。 3、充分混匀，向各管徐徐加入液体石腊5滴（避免与空气接触），静置试管架上或放37C水浴15’～30’，随时观察并记录各管退色情况，分析结果。 注： 1、乳酸脱氧生成的丙酮酸与KCN结合，不发 生其逆反应。 2、本实验中生成的甲烯白易被空气氧化又成 为甲烯兰，所以在加入液体石腊后观察褪 色时不宜振荡。 3、观察退色的管，振荡片刻会出现什么变 化？再放置一段时间有什么变化？解释这 些现象。 * * 2、取试管4只，标清管号，按下表加样： / 0.5 0.5 0.5 10 10 0.5 0.5 0.5 / 10 10 0.5 / 0.5 0.5 10 10 0.5 0.5 / 0.5 10 10 5%乳酸钠提取液（ml） 酶蛋白提取液（ml） 辅酶Ⅰ提取液（ml） 蒸馏水（ml） 0.5%KCN液（滴） 0.04%甲烯兰液（滴） 4 3 2 1