流式检测细胞周期线粒体膜电位MMP.pdf

中国试剂网 3.8.8.170 流式检测细胞周期 线粒体膜电位 （MMP ）： 使用几种染料中的其中一种就可以检测到细胞在凋亡过程中MMP 的降低，如双 氰基-双己氧基羰基靛蓝，它能够隐藏在活细胞的线粒体内。当 MMP 体系崩溃 时，细胞的荧光就会减少。 磷脂酰丝氨酸 （PS ）在细胞表面的分布情况： PS 一般分布在质膜的内侧上。在细胞凋亡过程中，PS 残余物会曝露在细胞表面。 这种变化可以通过复合蛋白钙依赖的磷脂结合蛋白V 与PS 结合来进行检测。所 使用的细胞必须是未经修复的，因为钙低速的磷脂结合蛋白 V 不能到达完整细 胞的内部。PI 常被用来加到二次坏死细胞中来进行鉴别。 DNA 消化： 在最新的细胞凋亡的一系列反应过程中，一种特异的内切核酸酶能够将染色体这 间的连接点打断，形成大量的小片段，这些小的片段是一些低聚体，其大小约为 180bp。可以通过以下两种方法对DNA 链的断裂进行检测：观察DNA 柱状图的 sub-G1 顶点；用脱氧核糖核苷末端转移酶对DNA 链的断口进行标记 （TUNEL 检测）。 Sub-G1 点： 如果细胞在乙醇中固定，随后再水合时，一部分低分子量的DNA 会被滤掉，以 降低DNA 的含量。这些细胞会在DNA 柱状图中作为独立的峰被观察到。 TUNEL 检测： DNA 链的断裂末端可以通过酶标记作用进行标记。在70%乙醇中固定之前，细 胞在 1%多聚甲醛中固定以将小的DNA 片段结合到细胞中去，然后和Tdt 以及 一种已标记的核苷一起进行培育。所用的这些核苷包括：地高辛－dUTP ，用经 FITC 标记的抗地高辛配基进行检测；生物素－dUTP，用经FITC 标记的抗生素 蛋白进行检测；溴－dUTP，用抗BrdUrd 的FITC 进行检测。 在加入 PI 标记 DNA 后，绿（FITC ）与红 （PI ）相对的荧光能够进行记录。凋 亡的细胞会发出绿色的荧光，经染色过的DNA 表明从凋亡的细胞中的细胞循环 间隔会被诱导产生。 细胞生长及死亡： 中国试剂网 3.8.8.170 组织的发育和肿瘤的生长在细胞分裂和死亡的平衡是同样的。在许多细胞动力学 研究中，它们具有同样重要的地位。细胞仪和部分多功能流式细胞仪在程序上给 予新的视觉。 细胞生长： 细胞增殖可以通过研究来进行检测：细胞周期；细胞通过细胞周期的运动率；细 胞周期相关蛋白；长期标记物的稀释 DNA 图示： 细胞通过用DNA 结合染料进行染色，如PI 。DNA 图示：能够作出对细胞在细 胞周期G1/G2，S 和G2/M 阶段的产量的评估；不能很好地提供有关细胞通过细 胞周期的运动信息；能够较易地进行免疫荧光结合染色；应一直作为很多研究领 域中的首选检测方法。 细胞周期中的细胞运动率： 这里提供两种常用的检测方法：在细胞用BrdUrd 和PI 标记的抗体标记后，再经 溴代脱氧尿苷 （BrdUrd ）进行脉冲标记。接着用Hoechst 332588 、PI 和二苯甲酰 胺标记DNA 方法用BrdUrd 对细胞进行标记。 用BrdUrd 进行脉冲标记： 经脉冲标记后，细胞在S 期就包含有BrdUrd 。通过细胞周期的细胞运动可以通 过以下方法进行检测。分析方法如下：动态的，在那些细胞周期进程中可以观测 得到；更复杂，因为在和抗体一起培育之前必须将DNA 变性；因而很难结合另 外的抗体标记；可以用来对动物肿瘤进行细胞动力学研究。 BrdUrd/Hoechst/PI 法： 在紫外线的激发下，结合到DNA 上的Hoechst 332588 会发出蓝色的荧光。这种 染料会优先结合到DNA 上的富AT 区域，它的荧光会被BrdUrd 淬灭。P