微生物学实验-2培养基的制备与高压蒸汽灭菌.pptVIP

实验三 培养基的制备实验四 高压蒸汽灭菌 实验三 培养基的制备 实验目的 明确培养基的配置原理。 通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基 的一般方法和步骤。 实验器材 1．溶液或试剂： 牛肉膏，蛋白胨，琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，NaCl，KNO3， K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O， FeSO4·7H2O， lmol/L NaOH lmol/L HCl。 2．仪器或其他用具： 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，电炉，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0 g NaCl 5.0 g 琼脂 15.0~ 20.0 g 水 1000 ml pH 7.4～7.6 高氏一号培养基配方 可溶性淀粉 20.0g KNO3 1.0 g NaCl 0.5 g K2HPO4·3H2O 0.5 g MgSO4·7H2O 0.5 g FeSO4·7H2O 0.01 g 琼脂 15.0~ 20.0 g 水 1000 ml pH 7.4～7.6 马铃薯（去皮） 200g 葡萄糖 20 g 琼脂 15~20 g 水 1000 ml pH 自然 脱脂乳培养基配方 Na2HPO4·12H2O 1.3 g KH2PO4·3H2O 0.36 g NaCl 0.5 g 脱脂牛奶 100ml 琼脂 15.0~ 20.0 g 水 900 ml pH 7.2 实验方法 1.称量 在上述烧杯中先加人少于所需要的水量，按培养基配方比例依次准确地称取放入烧杯中用玻棒搅匀。 2.溶化 在石棉网上加热使其溶解，并加水补足体积。 3.调pH 在未调 pH前，先用 pH试纸测量培养基的原始 pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入 lmol／L NaOH，边加边搅拌，并随时用 pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用 lmol／L HCl进行调节。 4. 过滤 用滤纸或多层纱布过滤。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去。 5. 分装 按实验要求，可将配制 的培养基分装入试管内或三角烧 瓶内。分装试管，其装量不超过 管高的1/5，灭菌后制成斜面。 6. 加塞 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 7. 包扎 在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明培养基名称、组别、配制日期。 8. 灭菌 将上述培养基以 0.103 MPa 121℃，20min高压蒸汽灭菌。 9. 摆斜面 将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 注意事项 1. 蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。 2. 在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。配置培养基时，不可用铜或铁锅加热熔化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。 3. pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内