生物大分子分走离纯化技术.pptVIP

第二章生物大分子分离纯化技术 * 2.4. 生物大分子的色谱分离纯化技术 2.4.1 高效毛细管电泳 高效毛细管电泳(High-performance Capillary Electrophoresis, HPCE)是荷电粒子在直流高压的作用下，在毛细管中迁移，从而进行高效、快速分离的一种电泳新技术。其分离是基于带电离子在电场中的不同的电泳淌度。它的基本原理与常规凝胶电泳或自由电泳并无本质的差别。所以，HPCE可以看成是一种仪器化程度比较高的电泳方式。 由于毛细管具有良好的散热性能，从而可以在毛细管两端加上高达30000 V 的高压、分离可以在很短时间内完成，分离效率非常高。这种方法所需样品体积只有?L-nL级。所以，HPEC法的特点为：高效、快速、微量、易于实现自动化，而且溶剂消耗少、环境污染小等等。 仪器 HPCE仪器的基本组成如图所示，它由毛细管，带电极的容器，高压直流电源，进样系统，检测器及数据采集和记录系统组成。比较先进的HPCE仪器还配有毛细管恒温设备，自动采样器，微制备组分收集器和基于计算机的自动化及数据评价系统。 1．毛细管 HPCE在毛细管中进行，管内径一般在25~100?m之间，外径在100—400?m之间．长度为0.1~1m。除了石英毛细管外，玻璃、聚四氟乙烯(PTPE)及聚氟乙烯-丙烯毛细管也有使用。 2．进样系统 为了保证HPCE分离的高效性，进样系统应尽量把nL-pL级的样品以最短的样品区带引入到毛细管中。 一般可采用电动法或流体力学法。 3．高压直流电源 高压电源需提供高达30 kV的直流电压。检测器位于毛细管的接地端，电流在3~300 ?A之间。电源应能以恒电压或恒电流(ITP)或恒功率的方式工作，其稳定件应达到设置值的?0.1%。另外，电源的正负极应可以切换，以适应带不同电荷的样品的分离。 4．检测 HPEC这种方法的灵敏度及高效性都依赖于检测器的高灵敏度，实际已经采用的检测器类型有多种。 HPEC中的主要检测技术 检测原理 最低检出浓度(mol/L) 最低检出量 适用范围 紫外－可见吸收法 10-6－10-4 10-15－10-13 通用/特殊情况 基于一般光源的荧光法 10-8－10-5 10-18－10-13 特殊情况 基于激光的荧光法 10-12－10-9 10-21－10-18 特殊情况 热光吸收法 10-8－10-5 10-17－10-14 通用/特殊情况 折射率法 10-7－10-5 10-16－10-14 通用 电导法 10-8－10-6 10-19－10-17 特殊情况 安培法 10-8－10-6 10-19－10-17 特殊情况 质谱法 10-9－10-5 10-17－10-15 通用 放射测定法 10-9－10-7 10-19－10-17 特殊情况 分离模式 HPCE的操作模式有多种，如毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis, CZE)；毛细管等速电泳(Capillary Isotachophoresis，CITP)，毛细管胶束电动色谱(Capillary Micellar Electrokin