吡格列酮对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌能量代谢的影响.pdfVIP

贵阳医学院 2011 届硕士研究生论文 材料与方法： 1.1 主要试剂及仪器 1.1.1 实验动物： 健康纯系雄性 Wistar 大鼠，体重（200 ±50 ）g，由第三军医大学新桥医院实验动物 中心提供。 1.1.2 主要试剂： 1.动物麻醉及处理：1％戊巴比妥钠；青霉素钠粉针；6/0、4/0 ，2/0 丝线；吡格列酮（北 京太洋药业，批号 040601 ） 2 线粒体呼吸活性、高能磷酸盐及ANT 活性检测试剂 1）ADP Sigma，美国； 3 2 ）H -ADP PerkinElmer ，美国； 3 ）SBC 蛋白定量试剂盒 云天生物工程公司； 4 ）苹果酸钠 上海生工生物工程公司； 5 ）丙酮酸钠 湖州生物化学试剂厂； 6 ）苍术苷(ATR) 9Sigma 公司，美国； 7 ）HClO4 天津东方化学试剂厂； 8 ）Tris Amresco ，美国； 9 ）线粒体分离介质 0.25mol/L 蔗糖，10mmol/L Tris-Hcl ，0.5mmol/L K＋-EDTA ，pH7.4 。-20 ℃中保存，临 用时于 4 ℃解冻，于冰上预冷。 10）线粒体呼吸反应介质 75mmol/L 甘露醇,25 mmol/L 蔗糖，10 mmol/L Tris-HCL(pH=7.4) ，100 mmol/L KCl， 5mmol/L K2HPO4，0.5mmol/L K＋-EDTA ，pH7.4 ，现配现用。 3.心肌组织总 RNA 提取和 RT-PCR 试剂： 1）Tripure Roche 公司，美国； 2 ）0.1%DEPC 水 Sigma 公司，美国； 1ml DEPC 加入 1000ml H2O 中，剧烈振荡，室温下静置过夜，高压蒸汽20 分钟，室温 3 贵阳医学院 2011 届硕士研究生论文 保存。 3 ）75%乙醇： 75ml 无水乙醇与 25ml 0.1%DEPC 水混合，室温保存 4 ）RT-PCR 两步法试剂盒： TaKaRa 公司 5 ）5mmol/L EDTA(PH 8.0) EDTA2H O 186.1g 2 双蒸水 800ml 1mmol/L NaOH 溶液调节 PH 至 8.0 8 ）5 ×TBE 缓冲液： Tris 碱 54g 硼酸 27.5g 0.5mol/L EDTA(PH 8.0)