第十三章病毒学 (2).ppt

* * * * * * * * * 细胞病变效应：病毒在细胞内增殖，可引起不同的结果，有的细胞完全被破坏，有的只有轻微的病变，或无可见的变化，由病毒引起的细胞病变，称CPE。往往随病毒种类和细胞类型不同而异。这些变化在一定条件下比较恒定。常见的为细胞变圆，坏死，溶解或脱落等。腺病毒 细胞变圆，并堆积成葡萄状，麻疹可形成多核巨细胞或融合细胞。 包涵体：某些病毒感染的细胞中，在光镜下，可见胞浆或核内出现嗜酸或嗜碱性染色，大小和数量不同的圆形或不规则的团块结构，称为 inclusive body。狂犬，baozhi，嗜酸；麻疹，核或胞浆，嗜碱。 * * * 尿囊腔接种 羊膜腔接种 流感病毒 流感病毒 尿液 羊水 血凝及血凝抑制试验 鉴定病毒 流感病毒+红细胞 血凝 流感病毒+特异抗体 血凝被抑制 初次 再次 鸡胚接种 常用的细胞培养 病毒增殖指标 细胞病变效应(Cytopathic effect, CPE) 包涵体（Inclusion Bodies） 多核巨细胞 病毒的鉴定 正常细胞 CPE 狂犬病毒包涵体（Negri body） 巨细胞病毒包涵体 光镜检查法 用光学显微镜直接检查某些细胞包涵体 巨细胞病毒包涵体 麻疹病毒感染形成多核巨细胞 狂犬病脑组织神经细胞胞质中包涵体 （Ｎegri 氏小体）等 形态学检查 电镜检查法 用电子显微镜观察病毒颗粒的形态， 适于检查含高浓度病毒的标本 用于甲型肝炎病毒、轮状病毒等的检测 近年来利用特异性免疫血清与标本混合 孵育后，用免疫电镜法检测，提高阳性率 用于轮状病毒、鼻病毒、甲型和戊型肝炎病毒、疱疹病毒等的检测 形态学检查 免疫荧光法（IFT） 可快速、早期检测难以培养的病毒， 如流行性出血热的汉坦病毒 上呼吸道上皮细胞内的流感病毒、腺病毒和呼吸道融合病毒（ＲＳＶ），疱疹水疱液中单纯疱疹病毒抗原 婴幼儿腹泻中的轮状病毒抗原等 检查病毒性抗原 免疫荧光法示意图 酶联免疫吸附检测法（ELISA） 可用分光光度比色计或肉眼观察结果， 无需特殊设备 用于HBV、流行性出血热、单纯疱疹、轮状病毒和EB病毒等抗原检测 检查病毒性抗原 SPRIA示意图 ELISA示意图 血凝抑制试验 用于流感、副流感和流行性乙型脑炎 因这些病毒可凝集动物红细胞，加入相应抗体后可抑制血细胞凝集现象 补体结合试验 用于流感、流行性乙型脑炎 用含已知病毒抗原，检查病人血清中未知抗体 中和试验 用于人群免疫水平的调查 酶联免疫吸附试验 已知抗原来测定抗体 检查病毒抗体 原 位 杂 交 检 测DNA病 毒 感 染 细 胞 病毒核酸的检测 聚合酶链反应（ＰＣＲ） 1985年美国Saiki等首先提出Polymerse Chain Reaction PCR是试管内特异性DNA片段扩增法，将DNA片段扩增10万倍，提高了试验的特异性和敏感性 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）也可特异性的扩增RNA片段 近年来成为临床病原诊断的重要工具 蛋白质转染技术 Southern blot 用于酶解后DNA片段的分子杂交检测 Northern blot 用于酶解后RNA片段的分子杂交检测 Western blot 蛋白免疫印迹试验，用于蛋白质转染技术 常用的血清学试验 肠道病毒等抗体检测 定量测定抗体及鉴定病毒 中和试验 流感病毒抗体的检测及病毒的鉴定 定量测定抗体及鉴定病毒 血凝抑制试验 乙脑等病毒抗体 定量测定抗体 补体结合试验 同ELISA 同ELISA 放免测定 确证HIV感染 检测抗原的特异性抗体 Western印迹法 轮状病毒等抗原，抗HIV等抗体 抗原和抗体定量测定 ELISA 同上 同上 酶免疫测定 活检标本中病毒HSV 抗原测定和定位 免疫荧光技术 应用举例 目的 方法 二、病毒感染的防治原则 免疫预防 病毒感染的治疗 人工自动免疫 减毒活疫苗 灭活疫苗 新型活疫苗 亚单位疫苗 人工被动免疫 丙种球蛋白 动物免疫血清 高效价Ig 免疫预防 基因工程疫苗： 合成编码保护性 抗原的基因片段 克隆表达 于载体 细胞、真菌 细菌等 大量增殖 基因重组疫苗 纯化 脊髓灰质炎疫苗 减毒活疫苗（人二倍体细胞、Vero细胞） 麻疹疫苗 减毒活疫苗（鸡胚细胞） 流行性腮腺炎疫苗 减毒活疫苗（鸡胚细胞） 风疹疫苗 减毒活疫苗（人二倍体细胞）