核糖体蛋白L1L10相互作用抑制剂的筛选及其抗结核-高电压技术.PDF

26 中国医药生物技术 2014 年 2 月第 9 卷第 1 期 Chin Med Biotechnol, February 2014, Vol. 9, No. 1 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.01.006 ·论著· 核糖体蛋白 L12-L10 相互作用抑制剂的 筛选及其抗结核活性的研究 李妍，张雪莲，李永臻，李东升，游雪甫，司书毅 【摘要】 相互作用有可能作为抗结核药物的靶标，本室前期 目的 以 L12-L10 相互作用为靶点筛选具有抗结核活性的 工作中成功构建了 L12-L10 相互作用的酵母双杂 先导化合物。 交模型并且初步证明其可以用于抗结核药物的筛 方法 应用酵母双杂交模型 AH109 （pAD-L12 + pBD-L10 ） 选[5]，本研究在此基础上对化合物库进行了扩大筛 通过生长抑制方法筛选阳性化合物，以 AH109 （pAD-T + 选并且对得到的阳性化合物进行了抗结核活性的 pBD-53 ）作为对照；通过 96 孔板法检测阳性化合物对耻 研究。 垢分枝杆菌的抑制活性；应用定量微孔板快速显色法 （MABA ）检测抗结核杆菌活性；通过 β-半乳糖苷酶活性 1 材料与方法 定量检测判断阳性化合物在模型上对 L12-L10 相互作用的 1.1 材料 阻断活性；应用体外蛋白表达系统检测阳性化合物对蛋白表 1.1.1 菌株 筛选模型 AH109 （pAD-L12 + 达的抑制作用；应用平皿二倍稀释法检测阳性化合物的药敏 pBD-L10 ）和 AH109 （pAD-T + pBD-53 ）由本室构 作用。 建；AH109 购自美国 Clotech 公司；耻垢分枝杆 结果 筛选到 4 个在模型上具有活性的阳性化合物，其对 菌 mc2 155 （ATCC 700084 ）为本室保存；结核分枝 耻垢分枝杆菌具有比较好的抑制活性，其最小抑制浓度 杆菌 H37Rv （ATCC 27294 ）和临床分离株由北京 结核病研究所提供；抗菌谱所用菌株及临床分离株 （MIC ）在 3.125 ~ 12.5 μg/ml 之间；其中 IBM-T275 对结 核分枝杆菌标准株和临床分离株均具有比较好的抑制活性， 由本所药理室保存。 MIC 在 5 ~ 10 μg/ml 之间，而对细菌抑制活性较低，其 1.1.2 试 剂 培 养 基 SD/-Trp-Leu 和 MIC 均在 64 μg/ml 以上；IBM-T275 能够抑制酵母模型内 SD/-Trp-Leu-His-Ade、INH、RFP 和 β-半乳糖苷酶 β-半乳糖苷酶的表达，并且能够体外抑制蛋白表达，其 IC50 活性检测所用试剂购自美国 Sigma 公司；化合物 库购自美国 J K 公司；E.coli T7 S30 线性 DNA 为 12.57 μg/ml 。 表达系统试剂盒和荧光素酶底物购自美国 Promega 结论 筛选到 1 个具有抗结核杆菌活性的阳性化合物，其 公司。 抗结核活性可能与阻断 L12-L10 蛋白相互作用相关。 1.1.3 主要仪器 EnVision 酶标仪为美国 【关键词】 抗结核药； 核糖体； L12-L10 相互作用 PerkinElmer