基于Gaussia分泌型荧光素酶的乳腺癌体内裸鼠模型的建立与五味子乙素和γ-五味子乙素抗乳腺癌活性评价-中药学专业论文.docxVIP

中文摘要 目的： 建立一种基于Gaussia分泌型荧光素酶（Gaussia luciferase，Gluc）的实时定量检测 实验动物体内肿瘤大小的模型，并利用该模型考察五味子乙素及其同分异构体γ-五味子 乙素的抗乳腺癌药效学活性。 方法： （1）分泌型荧光素酶乳腺癌模型的建立及评价。以Gaussia分泌型荧光素酶为报告 基因克隆到慢病毒载体，并进行慢病毒包装后感染乳腺癌MCF-7细胞，经嘌呤霉素稳压 筛选得到稳定表达Gluc的MCF-7-Gluc细胞，并检测细胞上清中Gluc活性随培养时间、细 胞数目及细胞传代代数的变化情况；将稳转细胞MCF-7-Gluc经扩大培养后皮下注射到雌 性BALB/c裸鼠前肢腋下，待肿瘤形成后，检测外周血液中Gluc活性与肿瘤体积的相关 性。 （2）细胞水平评价五味子乙素和γ-五味子乙素对乳腺癌细胞MCF-7-Gluc生长的抑 制作用。将两种药物按不同梯度（100、30、10和3μM）加入到96孔细胞培养板内，然 后通过CCK-8检测法检测两种药物对乳腺癌细胞MCF-7-Gluc生长的抑制效果，利用流式 细胞技术分析药物对乳腺癌细胞MCF-7-Gluc的凋亡作用。 （3）动物体内评价五味子乙素和γ-五味子乙素对乳腺癌的抑制作用。利用第一部分 方法建立基于分泌型荧光素酶的乳腺癌体内定量检测模型，待肿瘤形成后，通过检测外 周血中Gluc活性进行随机分组，然后开始给药。对照组每只小鼠每次灌胃生理盐水溶液 0.2ml； 癌泰得（cantide）组每只每次腹腔注射给药25mg/kg，注射药物溶液体积为0.2ml； 五味子乙素组每只每次灌胃方式给药100mg/kg，灌胃药物溶液体积为0.2ml；γ-五味子乙 素组每只每次灌胃方式给药100mg/kg，灌胃药物溶液体积为0.2ml。给药期间及给药后 观察药物对肿瘤生长与转移情况及对小鼠生存时间与体重的影响。 结果： （1）体外实验显示稳转细胞MCF-7-Gluc分泌到细胞上清的Gluc活性与培养时间和 细胞数量在一定范围内均呈现良好的线性关系，且一直保持较高活性；体内实验显示裸 鼠血液中Gluc活性与肿瘤体积呈正相关，但随着观察时间的延长Gluc活性增长比肿瘤体 积增长快，解剖荷瘤鼠后发现肿瘤出现转移。 （2）五味子乙素和γ-五味子乙素体外均可有效抑制MCF-7-Gluc细胞的增殖；五味 子乙素体内可一定程度抑制肿瘤生长；γ-五味子乙素可一定程度抑制乳腺癌肺转移；生 存率实验发现五味子乙素和γ-五味子乙素组在某些天内裸鼠死亡数虽然比阴性对照组 少，但统计学分析并没有显著性差异。 结论： （1）本研究表明 Gaussia 分泌型荧光素酶可作为一种灵活、方便、可实时定量检测 活体动物体内肿瘤大小的有效工具。 （2）五味子乙素及其同分异构体 γ-五味子乙素体外均可有效抑制乳腺癌稳转细胞 MCF-7-Gluc 的增殖；五味子乙素体内有一定抑制肿瘤生长的作用；γ-五味子乙素有一定 抑制肿瘤肺转移的作用；但两者均不能提高荷瘤裸鼠生存率。 关键词：Gaussia 分泌型荧光素酶；乳腺癌；五味子乙素；γ-五味子乙素 ABSTRACT Objective: To establish a real-time quantitation method based on the secreted Gaussia luciferase (Gluc) that can detect the tumor size of live animals in vivo sensitively and conveniently, and to evaluate the anti-breast cancer activities of Schisandrin B and its isomer γ-Schisandrin. Methods: Establishment and evaluation of breast cancer model based on the secreted Gaussia luciferase. First, the secreted Gaussia luciferase reporter gene was cloned into the lentiviral vector and the packaged lentivirus was collected. The breast cancer MCF-7 cells were infected by the lentivirus and then screened by puromycin for several weeks to obtain the stably transfected MCF-7-Gluc cells.