基于GC-MS的烟草代谢谱分析方法研究食品科学专业论文.docxVIP

摘 要 提高烟草制品的品质是目前烟草研究的主要目标，而烟草制品的品质与烟草 中的糖类、氨基酸、有机酸、黄酮类、萜类、甾体、生物碱类等代谢物紧密相关。 研究田间生长和管理、烟叶采收等因素可为烟叶和卷烟质量的提高提供理论参考 和指导。但已有的研究通常只针对某一类代谢物，实验结果不能反映生态环境、 品种、成熟度、等因素对烟草代谢的整体影响。而代谢组学是一门研究生物体系 受外界刺激时所产生的所有小分子代谢物变化的科学，可以从全局角度反映外界 刺激对烟草代谢的影响。基于此，本论文建立了两种种基于 GC-MS 的烟草主要 代谢物分析方法，并采用主成分分析（PCA）、偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA） 等模式识别方法对烟草代谢物变化进行了考察。主要内容包括以下两个部分： 一、 针对新鲜烟叶中的小分子代谢物，建立了衍生化 GC-MS 代谢谱分析 方法。该方法可实现糖类、氨基酸类、有机酸类、胺类、醇类等烟草代谢物的高 通量测定。该方法稳定性好，精密度高，生物样本的变异性远大于分析检测引入 的变异性，满足代谢组学的要求。不同地区新鲜烟叶 PCA 分析结果表明生长环 境对代谢物水平的影响大于品种的影响。利用 OPLS-DA 模型初步筛选了 20 种 区分不同地区新鲜烟叶的差异代谢物。采用衍生化 GC-MS 方法和 PCA、PLS-DA 化学计量学方法研究了不同生育期、不同部位成熟期烟叶的代谢物变化趋势。 二、 针对挥发性、半挥发性代谢物，建立了直接进样 GC-MS 代谢谱分析 方法。该方法可实现新鲜烟叶中萜烯类、醛类、酮类、酯类等挥发、半挥发代谢 物的同时快速测定，且稳定性好，精密度高。利用 PLS-DA 模型对不同地区成熟 期烟叶代谢物进行了分析，初步筛选了 13 种可能的差异代谢物。不同生育期新 鲜烟叶 PCA 分析结果表明盛花期是烟叶生长的关键生育期，并利用 PLS-DA 模 型初步筛选了 20 种区分不同生育期新鲜烟叶的差异代谢物。 关键词：烟草 小分子代谢物 GC-MS 代谢谱分析 Abstract At present, the main objective in tobacco research was to improve the quality and usability of tobacco products, which was closely related to the metabolites in tobacco leaves, such as sugars, amino acids, organic acids, flavonoids, terpenols, sterols, alkaloids, and so on. Therefore, it’s significant for improving the quality and usability of tobacco products to study the influence of plant growth, field management, maturity and harvesting on the metabolites. However, most previous studies just focused on specific groups of chemical components, the results could not reveal global changes of tobacco leaf caused by cultivars, environments, maturity, curing and many other variables. While metabolomics is a non-targeted method which is applied to characterize global changes of metabolites comprehensively. By analyzing the metabolites in plant tissues, we can know about responses of biological system to perturbations imposed on plants, including genetic or environmental changes using metabolomics. Based on this, two methods for the determination of metabolites in tobacco leaf were developed and the changes of metabolites dur